法呢基焦磷酸合成酶RNA干扰重组慢病毒载体构建及用途

摘要

本发明提供一种针对法呢基焦磷酸合成酶RNA干扰重组慢病毒载体的构建，在工具细胞293T细胞中筛选出FDS基因RNAi最有效靶序列，合成最有效靶序列的双链DNA连接到pGCSIL-GFP载体，通过酶切测序鉴定成功构建该重组载体。研究表明所构建的RNA干扰载体LV-sh-FDS在新生乳鼠心肌细胞中可下调FDS mRNA水平的表达，同时也能下调心肌肥厚标记如细胞面积和标记基因beta-MHC及BNP的表达，另外在下调FDS的同时也能有效抑制RhoA的活性，可在制备治疗心肌肥厚疾病的药物中应用。也可在制备胆固醇代谢调控药物中的应用。

主权项

一种针对法呢基焦磷酸合成酶RNA干扰重组慢病毒载体，其特征在于，所述载体含有慢病毒骨架质粒重组载体pGCSIL-sh-FDS，所述的重组载体是在p-GCSIL-GFP骨架质粒载体的MCS中连接了针对shRNA的双链DNA片段，针对的靶序列为：1#-GACAGCTTTCTACTCTTTC，合成的DNA片段信息为：1#-1：5’-CcggaaGACAGCTTTCTACTCTTTCTTCAAGAGAGAAAGAGTAGAAA GCTGTCt tT TTTTg-3’，1#-2：5’-aattcaaaaaaaGACAGCTTTCTACTCTTTCTCTCTTGAAGAAAGAG T AGAAAGCTGTCtt-3’。