构建BAC亚克隆库的方法

摘要

本发明提供了一种改进的BAC亚克隆库构建方法。主要通过以下步骤实现：BAC DNA的提取和纯化；BAC DNA的片段化及末端修补；目标片段的回收及与载体的连接；连接产物的转化。以玉米为例，构建的BAC亚克隆库中，克隆数超过1500，空克隆和大肠杆菌DNA污染率低于5％，插入片段平均为3kb。该方法具有简便、廉价、快速、高效的优点。

主权项

一种BAC亚克隆库的构建方法，包括以下步骤：1)碱裂解法提取BAC DNA；2)琼脂糖凝胶电泳分离BAC DNA和大肠杆菌基因组DNA；3)切取BAC DNA胶，加入溶胶液，用注射器抽打溶解了包含BAC DNA的胶块溶胶液，使BAC DNA断裂成≤50kb的片段，并用凝胶回收试剂盒回收纯化；4)将BAC DNA片段化，经纯化后进行末端修补；5)回收目标片段并与载体连接；6)转化连接产物，其中步骤3)在凝胶回收试剂盒回收纯化时，在漂洗及洗脱DNA之前使用去蛋白液洗吸附柱。