三叶青的组培快速繁殖方法

摘要

本发明公开一种三叶青的组培快速繁殖方法。包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根培养，移栽等步骤。本发明以MS培养基为基础，加入了辅助剂：活性炭、聚乙烯吡咯烷酮、6-苄基腺嘌呤、激动素、玉米素、萘乙酸、吲哚丁酸等，用于三叶青丛生芽诱导、壮苗及生根三个关键阶段的组织培养。本发明的优点：(1)三叶青的生产可以在人为控制条件下进行，不受季节、气候条件与土壤等因素的制约，可排除病虫害的侵染和农药残留的影响，严格控制三叶青药材的质量。(2)增殖速度快，生产周期短，设备简单，占地面积少，能节省人力、物力等，便于工厂化生产。(3)可以保存三叶青的种质资源，同时有利于保护野生资源，减少对自然资源的破坏。

主权项

一种三叶青的组培快速繁殖方法，其特征在于方法的步骤如下：1)挑选完整的腋芽为培养材料，经洗洁精和自来水洗净，置流水下冲洗30～40分钟后，置于75％酒精中处理20～30秒，然后再经0.1％的升汞Hgcl2消毒6～10分钟后用无菌水冲洗，将腋芽接种于诱导培养基中，诱导培养基为MS+BA1.0mg/l或MS+BA1.0mg/l+IBA0.1mg/l；2)将生长于诱导培养基上外植体转接于MS+BA0.5mg/l+NAA0.05mg/l+PVP0.5g/l、MS+BA0.5mg/l+PVP0.5g/l、MS+KT1mg/l+PVP0.5g/l、MS+KT1.0mg/l+NAA0.05mg/l+PVP0.5g/l或MS+ZT1mg/l+PVP0.5g/l的培养基上进行增殖培养；3)将进行增殖培养的高度为3～4公分壮苗转入生根培养基中，生根培养基为1/2MS+NAA0.3mg/l或1/2MS+BA0.05mg/l+NAA0.3mg/l+GA30.2mg/l；4)将已生根的植株取出，栽培于珍珠岩∶泥炭土为1∶1～2的混合基质上；所述的将腋芽接种于诱导培养基中：将所选取的腋芽接种于诱导培养基中，培养2～3周，看到有许多绿色的芽点和小的不定芽出现，诱导培养基的pH值5.8～6.0，培养温度25～27℃，每天光照时间为16小时，光照强度为35～40μmol.m-2.s-1；所述的将生长于诱导培养基上的芽转接于增殖培养基上进行增殖培养：培养20～25天，小芽长成3～4公分的无根苗，每个芽的周围有2～6个新芽出现，将丛生芽在无菌条件下取出，用解剖刀分开，置于上述增殖培养基中培养，在20～25天内，各芽再生出一至数个新芽。