一种从基因文库钓取未知基因的方法

摘要

本发明采用部分重叠引物设计，以甲基化cDNA文库为模板，进行PCR扩增，利用DpnI酶切，及DMT感受态细胞降解甲基cDNA文库，筛选包含未知基因的克隆。将该方法应用于试剂盒中，将大大方便使用者快速从基因文库中钓取基因，具有效率高，简单、省时的优点。

主权项

一种从基因文库钓取未知基因的方法，其步骤包括：(1)模板甲基化：用甲基化酶对文库DNA甲基化，(2)引物设计：根据未知基因的部分序列设计一对部分重叠的引物，引物长度为25-30个碱基，引物包括5′端重叠部分和3′端非重叠部分，引物长度为25-30个碱基，引物重叠部分碱基为15-18个，非重叠部分碱基至少10个，(3)PCR扩增：以甲基化文库DNA为模板，加入上述部分重叠引物，进行PCR扩增，(4)DpnI消化：在步骤(3)获得的扩增产物中，加入DpnI限制性内切酶，消化甲基化模板，(5)转化DMT细胞：用DpnI消化产物转化DMT细胞，(6)测序得到包含目的基因的质粒DNA。