Ｃ-端含有组胺酸标记之ＨＯＸＢ４重组蛋白质之制造方法及其于干细胞增生之用途;PROCESS FOR PRODUCING C-TERMIAL HISTIDINE TAGGED HOXB4 AND THE USE THEREOF IN EXPANDING STEM CELLS

摘要

本发明系关于一种经改良之C-端含有组胺酸标记之HOXB4重组蛋白质(即，TAT-HOXB4H)的制造方法，其中该TAT-HOXB4H于C-端含有6个组胺酸标记。更特别地，系关于构筑一种用于生产TAT-HOXB4H重组蛋白质之构体，该重组蛋白于宿主细胞(例如大肠杆菌)产生后，可增加蛋白纯化效率达三至四倍。本发明亦关于使用所制造得之TAT-HOXB4H重组蛋白质于活体外干细胞增生的方法及组成物。

主权项

1.一种用于制造C-端含有6个组胺酸标记之HOXB4重组蛋白质(TAT-HOXB4H)的方法，该方法包含：(1)构筑得其中于HOXB4开放读框(ORF)之C端含有6个组胺酸编码片段之DNA构体，其具有如SEQ ID NO:1所示之DNA序列；(2)将于步骤(1)所得之构体转形至大肠杆菌宿主细胞中表现该TAT-HOXB4H重组蛋白；以及(3)自该于步骤(2)所得之重组大肠杆菌宿主细胞溶解产物纯化该TAT-HOXB4H重组蛋白质。 ;2.根据申请专利范围第1项之方法，其中该DNA构体系藉由PCR方法将额外4个组胺酸编码序列导入TAT-HOXB4开放读框(ORF)之C端。 ;3.一种用于增加TAT-HOXB4H重组蛋白质产量之DNA构体，其特征在于TAT-HOXB4开放读框之C-端已导入6个组胺酸标记，且具有如SEQ ID NO:1所示之DNA序列。 ;4.一种用于干细胞活体外增生之培养基，其包含5-100 nM根据申请专利范围第1项之方法所制得之TAT-HOXB4H重组蛋白质，及适用于干细胞增生之细胞营养物质、细胞因子与抗生素。 ;5.根据申请专利范围第4项之培养基，其中该干细胞为脐带血干细胞。 ;6.根据申请专利范围第4项之培养基，其中该干细胞为造血干细胞。;图1.列示本发明新颖C-端含6个组胺酸标记之构体pTAT-HOXB4H之构筑流程。;图2.列示经纯化后，本发明之TAT-HOXB4H与习知TAT-HOXB4之产量比较结果。箭头所指为TAT-HOXB4H及TAT-HOXB4之蛋白质电泳位置，显示TAT-HOXB4H较TAT-HOXB4之纯化产量增加大约4倍。;图3.列示以TAT-HOXB4H(三角形)及TAT-HOXB4(方形)促进活体外脐带血干细胞增生之比较结果，其以CD34+细胞数量之测量值表示。对照组系以BSA处理(菱形)。