检测残留的氯霉素的酶联免疫试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种检测残留的氯霉素(CAP)的酶联免疫试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括包被有CAP抗体的微孔板(1)、CAP标准品(2)、浓缩洗涤液(3)、浓缩酶标CAP(4)、酶标稀释液(5)、底物液(6)和终止液(7)。本发明的检测方法采用直接竞争法，使CAP标准品或待测样品与酶标CAP竞争微孔板上的CAP抗体，没有与CAP抗体结合的酶标CAP在洗涤步骤中被去除，被抗体结合的酶标CAP将无色的发色剂转化为蓝色产物，最后通过测试吸光度，得到吸光度比值，并与标准曲线比对，即可获得残留的氯霉素含量。本发明方法可以直接检测动物源食品、尿液和血清样品中的CAP，其操作更简便、快捷，操作时间仅须50分钟，且灵敏度可达0.025μg/kg。

主权项

一种检测残留的氯霉素的酶联免疫试剂盒，包括微孔板(1)、氯霉素标准样品(2)、浓缩洗涤液(3)、浓缩酶标氯霉素(4)、酶标稀释液(5)、底物液(6)和终止液(7)，其中所述微孔板(1)是包被有兔抗氯霉素IgG的微孔板，即用0.05mol/L的pH值为9.6的Na2CO3-NaHCO3缓冲液将兔抗氯霉素IgG稀释至0.1μg/mL，按每孔100μL的量添加到所述微孔板中，在4℃下放置过夜，弃去包被液，用稀释后的洗涤液洗板3次，真空抽干，将该微孔板密封后置-20℃下保存；所述浓缩酶标氯霉素(4)是10～100倍浓缩酶标氯霉素，其用碳二亚胺法将琥珀酸钠氯霉素(CAP)连接到卵清白蛋白(OVA)上制备CAP-OVA，然后用高碘酸钠法将辣根过氧化物酶(HRP)标记到CAP-OVA上制备成CAP酶标物(CAP-OVA-HRP)，用酶联免疫吸附试验测定CAP-OVA-HRP原液的工作浓度，将CAP-OVA-HRP原液用含10％小牛血清(体积比)的PBS稀释至工作浓度(浓度在0.1μg/mL～1μg/mL之间)的10～100倍，该酶标CAP溶液即为10～100倍浓缩酶标氯霉素。