海水蛭弧菌微生态制剂的制备与应用

摘要

海水蛭弧菌微生态制剂的制备与应用，涉及一种海水微生态制剂，需要提供适合于海水养殖用的蛭弧菌制剂的制备方法。本发明由以下步骤组成：制备宿主菌悬液；蛭弧菌的分离、纯化；蛭弧菌增殖培养，其特征是将施氏假单胞菌接斜面活化后，在试管中加入生理盐水制得菌悬液，然后用营养肉汤增殖培养，在所得菌液中加入絮凝剂，摇匀后静置沉淀，加入生理盐水得到1012cfu/mL的宿主菌悬液；用双层琼脂平板法对采集的海水和底泥样品进行蛭弧菌的分离和纯化，将含有宿主菌悬液和采集样品的培养基混匀后倒入下层海水琼脂上培养，将宿主菌和分离得到的蛭弧菌加入到灭菌天然海水中培养至蛭弧菌浓度为108～109pfu/mL，备用。

主权项

海水蛭弧菌微生态制剂的制备与应用，由以下步骤组成：制备宿主菌悬液；蛭弧菌的分离、纯化；蛭弧菌增殖培养，其特征是将非致病性施氏假单胞菌接斜面活化后，在试管中加入2ml左右的生理盐水制得菌悬液，然后用营养肉汤增殖培养18-24h，在所得菌液中加入絮凝剂，摇匀后静置2-5h，收集沉淀，加入生理盐水即得到1012cfu/mL的宿主菌悬液；采用双层琼脂平板法对采集的海水和底泥样品进行蛭弧菌的分离和纯化，将含有宿主菌悬液和采集样品的培养基混匀后倒入预先制备的下层海水琼脂上培养6～7天，在含宿主菌的双层平板出现噬菌斑，根据噬菌斑的大小形态、清晰度和色素对分离得到的噬菌斑进行分类，采用单斑传代，挑取不断扩大的单斑重复三次以上，至形成形状、大小、透明度均一致的噬菌斑为止，所得即蛭弧菌纯菌株；将宿主菌和分离得到的蛭弧菌加入到灭菌天然海水中，用灭菌纱布封口，摇床培养一周，至蛭弧菌浓度为108～109pfu/mL。