适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量Hg²⁺的方法

摘要

本发明公开了一种适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量Hg2+的方法，它是利用Hg2+可以稳定ssDNA序列中的T-T错配，使ssDNA无法稳定AuRe复合纳米微粒，从而使AuRe复合纳米微粒在高浓度电解质条件下发生聚集这一现象，将其和纳米金铼催化反应有机地结合起来，催化反应生成的碲微粒存在共振散射，Hg2+与共振散射强度呈线性关系。测量时先制备已知汞浓度的测试体系和试剂空白体系，测两体系波长在734nm的共振散射强度，绘制工作曲线，再制备样品检测体系，求其ΔI样，依据工作曲线，求得样品中汞的含量。本发明的优点是：与已有的方法相比，本测定方法的仪器简单，操作简便，灵敏度高，选择性好，反应条件容易达到；本法所用核酸适配体及Hg2+溶液浓度低，试剂用量少，成本低廉。

主权项

适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量Hg2+的方法，其特征是：测定方法包括步骤如下：(1)制备金铼复合纳米微粒：常温下，量取40.0mL二次蒸馏水于50mL锥形瓶，磁力搅拌器搅拌的同时加入HAuCl4溶液、铼酸盐溶液、碳酸钾溶液，充分混合后，加热，使温度在35℃左右，缓慢滴加硼氢化钠，溶液颜色从暗红色变为红黑色再变成红色，之后颜色不再改变，继续搅拌10min，最后定容到50mL，得到浓度为52.2μg/mL的AuRe复合纳米微粒，金/铼的摩尔比为9∶1，4℃密封保存；(2)制备AuRessDNA探针在50mL锥形瓶中加入1.8mL 0.17μmol/L ssDNA，37.5mL 52.2μg/mL AuRe纳米溶液，混合均匀室温下静置5min，使ssDNA与AuRe纳米颗粒充分组装形成AuRessDNA备用，以Au计算，其浓度为49.8μg/mL AuRessDNA；(3)制备滤液：在7支5mL的具塞刻度试管中，依次加入400μL pH 7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液，393μL49.8μg/mL AuRessDNA，混合均匀室温下静置5min，然后加入不同量Hg2+溶液，加入30.0μL2mol/LNaCl溶液，用二次蒸馏水定容到1.5mL，反应液用0.15μm滤膜过滤，取滤液备用，其中第一管不加Hg2+溶液，作滤液的空白；(4)制备已知Hg2+浓度的催化反应测定体系：在5mL的具塞刻度试管中，依次加入0.3mL0.012mol/LNa2TeO4溶液，0.15mL 0.3mol/L酒石酸溶液；30μL含不同浓度Hg2+的滤液，0.7mL0.9mol/L SnCl2溶液，混匀，定容到3mL，置于恒温水浴锅中在65℃下加热10min，流水快速冷却至室温，用荧光分光光度计λex-λem＝Δλ＝0条件下同步扫描获得共振散射光谱，测定734nm波长处的共振散射光强度I734nm；(5)按步骤(4)的方法，以不含Hg2+滤液的第一管为空白体系，并测定其共振散射强度(I734nm)0；(6)计算ΔI734nm＝(I734nm)0-I734nm；以ΔI对Hg2+的浓度关系作工作曲线；(7)样品测定：依照步骤(4)的方法制备检测体系，其中加入的水样为含有Hg2+但未知浓度的被测物，求出被测物的ΔI样；(8)依据步骤(6)的工作曲线，计算出被测物的Hg2+的浓度。