一种酶制剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种酶制剂的制备方法。硫化氢作为气态信号分子在多种生理过程中发挥重要作用。本发明方法首先从自然环境中取土样或水样并分离出单菌落，将各单菌落分别在硫化氢产生培养基中培养，选最短的时间内能使培养容器口的经醋酸铅溶液浸泡并烘干的滤纸条变黑的菌株作为生产菌种，硫化氢产生培养基的配方是每1000毫升中含牛肉膏2.5～3.5克、蛋白胨8～12克、氯化钠4～6克、L-半胱氨酸0.15～0.25克；将筛选到的生产菌株逐级扩大培养后进行发酵培养；然后将发酵培养后的培养液离心处理，收集细胞；将细胞破碎后干燥得到粉末状固态酶制剂。本发明方法工艺相对简单易行，适合工业化生产，制备的酶制剂利用L-半胱氨酸作为底物可以缓慢释放硫化氢。

主权项

一种酶制剂的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤是：(1)从自然环境中取土样或水样，用稀释涂布法分离出单菌落，将分离得到的各单菌落分别接种至不同的试管中，在25～37℃条件下培养；试管中装有已灭菌的硫化氢产生培养基，试管口夹有经浓度为0.8～1.5％(w/v)的醋酸铅溶液浸泡并烘干的无菌滤纸条；选取在最短的时间内能使滤纸条变黑的菌株作为硫化氢产生酶制剂的生产菌种；所述的硫化氢产生培养基的配方是每1000毫升硫化氢产生培养基中含牛肉膏2.5～3.5克、蛋白胨8～12克、氯化钠4～6克、L-半胱氨酸0.15～0.25克，余量为水，pH值为7.0～7.5；(2)将筛选得到的硫化氢产生菌株进行逐级扩大培养至发酵所需的菌种量，每级扩大培养的接种量为1～10％(v/v)；然后在25～37℃条件下发酵培养18～48小时；所述的发酵培养采用发酵罐通气搅拌培养，发酵罐罐压0.03～0.06Mpa，通气量为1∶0.3～0.5(v/v)，发酵罐搅拌速率为200～350转/分；(3)将发酵培养后的硫化氢产生菌培养液在4000～12000g的转速下离心10～20分钟，收集细胞；(4)将细胞用1～10倍体积的pH为7.0～8.0的缓冲液悬浮，然后破碎细胞，得到硫化氢产生酶的液态酶制剂；(5)将液态酶制剂进行干燥，得到粉末状固态酶制剂。