一种干细胞体外衍生化肝细胞模型的应用

摘要

本发明提供一种小鼠胚胎干细胞体外衍生化肝细胞模型的应用，主要用于以过氧化物酶体增殖激活受体为靶点的促细胞分化剂筛选。也可利用干细胞衍生化肝细胞模型阐明肝脏发育能量代谢相关的PPARs家族表达谱和功能，揭示胚胎肝脏发育的生命现象本质。也可利用干细胞衍生化肝细胞模型，构建以PPARs家族为靶点的高效率药效筛选模型，进行调节肝脏能量供应药效初步筛选与评价，发现新一类促进干细胞分化为肝细胞的能量代谢诱导剂。本发明开拓了干细胞衍生化肝细胞模型的一种新用途，即能作为肝脏发育能量代谢研究的替代模型，明确肝脏线粒体能量系统发育相关的PPARs家族表达特征，可用于以PPARs为靶点的促肝细胞能量代谢分化剂筛选。

主权项

一种小鼠胚胎干细胞体外衍生化肝细胞模型的应用，所述小鼠胚胎干细胞体外定向分化为肝细胞模型通过以下步骤构建：采用悬滴培养法，将小鼠胚胎干细胞以600个细胞/30μl滴的密度接种于培养皿盖子内表面上，然后翻转盖子，使盖子上的小滴倒挂成悬滴，培养5天形成拟胚体，再将拟胚体转移到放有用明胶包被的24孔板内进行常规贴壁培养，用倒置显微镜每天观察细胞，以捕捉肝细胞定向分化的形态变化，同时采用免疫荧光法检测肝细胞特异性蛋白表达，以白蛋白特异性染色确定小鼠胚胎干细胞分化而来的是肝细胞，其特征在于，该模型在筛选与评价调节肝脏能量供应的能量代谢诱导剂药物中的应用。