蛋白质定位标记方法

摘要

本发明涉及蛋白质定位标记方法，包括N-S酯酰基重组、巯基小分子参与的转酯作用、多肽参与的转酯作用、S-N酯酰基重组，用于蛋白拼接的两条蛋白和多肽，其中一条N-末端必须是Cys，另一条C-末端必须含有硫酯基团(-NR)，本发明方法将一段蛋白和多肽通过形成肽键连接起来形成新的蛋白分子，该蛋白具有和生物体内蛋白质分子完全一样的序列、标记位点和空间构象，是取代酸化的多肽及其它特殊修饰多肽的下一代产品，解决了现有技术尚没有方法可以在体外获得定点标记的磷酸化蛋白致使磷酸化蛋白的研究受到很大限制的缺陷。

主权项

蛋白质定位标记方法，其特征在于包括步骤如下：(1).N-S酯酰基重组将目标蛋白的片段与内含肽形成的融合蛋白与几丁质亲和树脂结合，蛋白质内含肽N末端剪切点的半胱氨酸(Cys)残基侧链的N-S发生转酯酰基反应，形成一个线性中间产物；(2).巯基小分子参与的转酯作用转酯作用需要具有亲核残基的参与，含有巯基的小分子和目标蛋白结合生成C-末端含有硫酯基团的蛋白，并与亲和树脂上的融合蛋白的其余部分分离；(3).多肽参与的转酯作用加入含有N末端半胱氨酸(Cys)残基侧链的多肽分子，形成了一个含有多肽和目标蛋白的线性酯类中间体；(4).S-N酯酰基重组N末端多肽半胱氨酸(Cys)残基侧链发生S-N转酯酰基反应以肽键连接形成目标蛋白质。