橡胶树子叶胚胚性愈伤高效遗传转化方法

摘要

本发明属生物技术领域，涉及一种橡胶树子叶胚胚性愈伤高效遗传转化方法，其特征是在橡胶树花药或内珠被组织培养，以子叶胚为外植体，进行诱导、遗传转化，然后将转化后的胚性愈伤诱导成胚，对成熟胚进行选取后诱导成苗。本发明工艺流程简单，转化效率极高，成本低，克服了橡胶树遗传转化体系成胚率低、胚性愈伤组织诱导时间长等严重缺陷；同时也弥补了橡胶树转化受体材料的获得易受季节等自然条件限制的缺点，大大缩短了转化周期，是一种高效的橡胶树遗传转化方法，具有很大的科研及应用价值，为橡胶树转化体系的建立开创了展新的技术路线。

主权项

一种橡胶树子叶胚胚性愈伤高效遗传转化方法，其特征在于：包括胚性组织的选取与处理过程、体细胞胚高效胚性愈伤组织的诱导与选择过程、遗传转化过程、转化后的胚性愈伤诱导成胚过程、成熟胚的选取与诱导成苗过程；1)、胚性组织的选取与处理过程：在橡胶树花药或内珠被组织培养的基础上，选择花药或内珠被脱分化愈伤经胚诱导过程产生的新鲜、健康，长1cm以上的子叶胚为外植体，进行切片处理；2)、体细胞胚高效胚性愈伤组织的诱导与选择过程：将子叶胚切片接种到胚性愈伤诱导培养基上于26～28℃进行暗培养20～30天；所述胚性愈伤诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，并添加0.5～2ppm 2，4-D、0.5～2ppm KT、0～1ppm BA、0～2ppm NAA、0～2ppm ZT、蔗糖70～90g/L、椰子水50ml/L、0.1～2g/L天门冬酰胺和0.1～0.2g/L肌醇；3)、遗传转化过程：利用基因枪或农杆菌介导法，以暗培养20～30天的子叶胚胚性愈伤组织为转化受体进行遗传转化；4)、转化后的胚性愈伤诱导成胚过程：将转化后的子叶胚胚性愈伤接到胚诱导培养基上于24～26℃进行暗培养至生成子叶胚；所述胚诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，其中大量元素减少10～50％，微量元素增加0.5～2倍，并添加0.5～3ppm BA、0.5～3ppm KT、0～0.5ppmNAA、0.2～1ppm GA、0～.5ppm ABA、水解酪氨酸50～300mg/l、加0.1～0.2g/L肌醇、麦芽糖0～20g/L、蔗糖50～70g/L和椰子水50ml/L；5)、成熟胚的选取与诱导成苗过程：选取经筛选过程产生的健康、完整、高1.5cm以上的子叶胚接到自根苗培养基上于28～30℃进行光培养至抽出健状茎段；所述自根苗培养基是以MS培养基为基础培养基，其中大量元素减少10～30％，并添加0～2ppm BA、0.5～2ppm KT、0.2～1ppm NAA、0.5～1.5ppmGA、糖30～50g/L和椰子水50ml/L。