用于筛选多胜肽聚集调节剂之重组蛋白与方法;RECOMBINANT PROTEIN AND METHOD OF SCREENING FOR AGENTS THAT MODULATE POLYPEPTIDE AGGREGATION

摘要

本发明提供一重组蛋白包含式A-B，其中A系一个含有8-200个麸胺醯胺之多麸胺醯胺区域；B系一个能被调节而决定细胞颜色的酵素。本发明亦提供表现载体和其所制得细胞。本发明进一步提供一种筛选神经退化疾病药剂的方法及套组。

主权项

1.一重组蛋白，其组成成分包含式A-B，其中A系一个含有8-200个麸胺醯胺之多麸胺醯胺区域；B系一个能被调节而决定细胞颜色的酵素。 ;2.根据申请专利范围第1项之重组蛋白，其中多麸胺醯胺之区域包含25~100个麸胺醯胺。 ;3.根据申请专利范围第1项之重组蛋白，其中该酵素可反应重组蛋白的形态改变。 ;4.根据申请专利范围第3项之重组蛋白，其中该酵素系为ADE2(磷酸核醣胺基咪唑羧酶)。 ;5.一个表现载体，其可表现出申请专利范围第1项重组蛋白。 ;6.根据申请专利范围第5项之载体，该载体更包含一个启动子位于重组蛋白之核苷酸序列上游。 ;7.一种细胞，其系以申请专利范围第5项之载体转型或转染。 ;8.根据申请专利范围第7项之细胞，其中该细胞系细菌、酵母菌、真菌、哺乳动物或昆虫细胞。 ;9.根据申请专利范围第7项之细胞，其中该细胞呈红色则代表重组蛋白之聚集。 ;10.一种筛选神经退化疾病药物的方法，其包含：(A)一申请专利范围第7项之细胞，其中表现含有8~25个麸胺醯胺蛋白之细胞为正对照组，表现含有85~100个麸胺醯胺蛋白之细胞为实验组；(B)令一候选药物在实验组和正对照组同时处理；及(C)藉由实验组和正对照组不同的颜色改变，确认候选药物是否为治疗剂。 ;11.根据申请专利范围第10项之方法，其中该方法更包含未用候选药物处理并且表现含85~100个麸胺醯胺蛋白之细胞当作负对照组。 ;12.根据申请专利范围第11项之方法，其中该负对照组系用于确认实验组的颜色改变。 ;13.根据申请专利范围第10项之方法，其中神经退化疾病系由蛋白质多胜肽聚集所造成。 ;14.根据申请专利范围第13项之方法，其中神经退化疾病系为杭丁顿式舞蹈症、齿状核红核苍白球路易体萎缩症(DRPLA)、脊髓小脑萎缩症、脊髓性肌肉萎缩症、阿兹海默症、帕金森氏症、克一亚二氏症或克鲁症。 ;15.根据申请专利范围第10项之方法，其中重组蛋白包含多麸胺醯胺区域及ADE2酵素。 ;16.根据申请专利范围第10项之方法，其中细胞颜色系由红色改变为粉红色或白色。 ;17.一种筛选神经退化疾病药剂之套组，其包含申请专利范围第1项之重组蛋白。 ;18.根据申请专利范围第17项之套组，其中神经退化疾病系为杭丁顿式舞蹈症、齿状核红核苍白球路易体萎缩症(DRPLA)、脊髓小脑萎缩症、脊髓性肌肉萎缩症、阿兹海默症、帕金森氏症、克一亚二氏症或克鲁症。 ;19.根据申请专利范围第17项之套组，其包含一转型或转染入重组蛋白之细胞。 ;20.根据申请专利范围第19项之套组，其中该细胞系为酵母菌细胞。;图一：(A)不同长度的多麸胺醯胺片段和ADE2重组基因的建立。(B)表现不同ADE2重组蛋白之细胞菌落颜色。;图二：(A)用过滤萃取的方法侦测ADE2重组蛋白的聚集。(B)藉由狭缝吸渍的方法证明不同ADE2品系报导蛋白表现量相似。;图三：(A)以颜色为依据之酵母菌药物筛选系统进行药物处理。(B)(A)中产生的颜色变化，是因为97Q-ADE2聚集量减少造成。;图四：确认以细胞颜色为依据之药物筛选系统。酵母菌中加入不同浓度的氢氯化胍(GuHCL)，并培养在48孔盘中。