一种从植物提取物中筛选1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构化酶抑制剂的方法

摘要

本发明涉及一种从植物提取物中筛选1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构化酶(DXR)抑制剂的方法，通过采用纸色谱法、薄层色谱法或反相离子对HPLC法检测底物转化量的降低来评价所添加的植物提取物对DXR的抑制作用。主要涉及到：纸色谱分析时所用的展开剂为95％乙醇∶1M乙酸胺∶1M EDTA＝70∶29∶1(v/v/v)，显色剂为硫酸乙二胺水溶液；薄层色谱分析时所用的展开系统为氯仿∶甲醇＝3∶1(v/v)，显色剂为硫酸乙醇溶液；反相离子对HPLC法利用两相溶液梯度洗脱方法进行检测。本方法在抑制剂的筛选过程中，所用底物1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸，辅酶NADPH均不含同位素标记。筛选过程简单、快速、可行性强，不需要用昂贵的大型仪器检测。

主权项

一种从植物提取物中筛选1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构化酶抑制剂的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤(1)用于检测1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构化酶抑制剂的样品的制备将未标记的底物1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸、辅酶NADPH、1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构化酶DXR和二价金属离子加入到缓冲液中，再加入植物提取物，该反应体系反应，制备出用于检测DXR抑制剂的样品；(2)对照样的制备将未标记的底物1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸、辅酶NADPH、DXR和二价金属离子加入到缓冲液中，该反应体系反应，制备出对照样；(3)色谱法检测用纸色谱法、高效液相色谱法或薄层色谱法检测步骤(1)的样品和步骤(2)的对照样中的1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸的转化情况；以对照样为参比，根据各样品中底物1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸的转化量是否减少来判断所加植物提取物对DXR活性有无影响，进而筛选出DXR的有效抑制剂。