一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法。利用大豆胰蛋白酶抑制剂可抑制胰蛋白酶的专一性，将胰蛋白酶固定化，分离纯化大豆乳清废水中大豆乳清蛋白获得高纯度的大豆胰蛋白酶抑制剂。该方法操作简便、费用低并获得了高纯度的产品。该大豆蛋白酶抑制剂具有强抗癌活性且毒性小，它有望成为一种抗癌、治疗糖尿病的新药用于临床，并且对环境保护和治疗癌症均有十分积极的意义。

主权项

一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)大豆胰蛋白酶抑制剂的提取和初级分离大豆乳清废水用HCl溶液调pH，静止，收集沉淀，离心干燥，得到大豆乳清蛋白。大豆乳清蛋白加水，用NaOH溶液调pH，水浴搅拌溶解反应，用无水硫酸铵调饱和度，水浴保温反应，离心除沉淀，重复一次。将沉淀先用蒸馏水透析，再用磷酸缓冲液透析去盐。透析溶液上离子交换柱，用的HCl洗脱，收集蛋白组分。合并洗脱液减压浓缩至原体积1/3，用NaOH溶液调pH，再上离子交换柱用磷酸缓冲液洗脱，收集蛋白组分。(2)固定化胰蛋白酶制备碱性苯乙烯阴离子交换树脂经酸、碱、乙醇、去离子水洗活化后待用。取胰蛋白酶溶于的磷酸缓冲液与处理过的树脂混合，缓慢搅拌吸附，加戊二醇搅拌均匀，交联，用的磷酸缓冲液洗涤至液体无酶活性。(3)胰蛋白酶抑制剂纯化合并有胰蛋白酶活性的洗脱液，减压浓缩至原体积1/3。用HCl溶液调pH，上固定化酶柱，HCl溶液洗脱，在280nm测蛋白质吸收值，至无蛋白吸收峰为止。再用含有NaCl、CaCl2和异丙醇的HCl溶液洗脱，收集蛋白组分。将得到的洗脱液经浓缩、透析、真空干燥，得到白色粉末物质。