一种HBV病毒rtA181V突变的荧光扩增检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种HBV病毒rtA181V突变的荧光扩增检测试剂盒。本发明针对rtA181V变异(即181GCT→GTT突变)设计了一对引物和分别用两种荧光染料标记的一对特异性探针，在单管内使用双色荧光定量PCR技术实现了分别对总HBV病毒DNA和发生rtA181V变异的HBV病毒DNA进行定量检测。本发明还人工设计了rtA181V变异型DNA模板用于制作HBV总DNA和突变型DNA的定量标准曲线。本发明技术能快速、简便的对HBV DNA和rtA181V变异的HBV DNA同时进行定量检测，具有较高的特异性和灵敏性。

主权项

一种HBV病毒rtA181V突变的荧光扩增检测试剂盒，其特征在于包含一对特异性引物和一对特异性探针，扩增目标片段长度为94bp，引物序列为：引物1：5`-GGCTTTCGCAAGATTCCTA-3`(Seq No.1)引物2：5`-GGAAAGCCCTACGAACCA-3`(Seq No.2)或者上述引物序列的互补序列，或者上述序列同源性大于75％的序列。设计的两条探针方向相反，除突变检测位点和3’端外(突变检测位点序列可互补，也可不互补，根据检测要求决定)其余区域互补；探针1和探针2的Tm值相近，同时也与两条引物的Tm值相近(相互间的差异均小于3℃)，两条探针的3’端除互补序列外均延伸2-4个碱基；探针1在rt81密码子位点对应位置使用了“GTT”，在荧光PCR检测中，对野生株(rt81A)和变异株(rt81V)相应序列均能进行杂交配对，产生荧光扩增信号，可用于检测总的HBV病毒DNA，探针2能与变异株(rt81V)相应序列特异性杂交配对，产生荧光扩增信号，用于检测rtA181V变异(即GCT→GTT)。探针序列为：探针1：5`-TTTCTCCTGGTTCAGTTTACTAGT-3`(Seq No.3)探针2：5`-TAAACTGAACCAGGAGAAACG-3`(Seq No.4)或者上述引物序列的互补序列，或者上述序列同源性大于75％的序列。