磁性壳聚糖复合微球制备固定化葡萄糖异构酶的方法

摘要

本发明涉及的是磁性壳聚糖复合微球制备固定化葡萄糖异构酶的方法，该方法为：一、向FeCl2和FeCl3中，加入聚乙二醇，溶解，再用氨水调节溶液至pH8～10，洗涤抽滤后真空冷冻干燥即得Fe3O4磁核；二、将壳聚糖粉末溶解在乙酸中超声分散，制壳聚糖溶液，通过乳化剂与Fe3O4磁核超声分散并搅拌，与1％～5％戊二醛交联在2000r/min下继续搅拌，洗涤抽滤真空冷冻干燥后即得磁性壳聚糖复合微球；三、将磁性壳聚糖复合微球先用磷酸缓冲液pH7.0～7.8浸泡，抽滤后加入用缓冲液稀释后的葡萄糖异构酶，振荡，取出放入冰箱中静置过夜，倾出上清液，沉淀洗涤，抽滤得固定化葡萄糖异构酶。本发明通过磁性壳聚糖复合微球固定化葡萄糖异构酶其活性回收率可达80％以上，酶的使用效率高，可重复使用，成本低。

主权项

一种磁性壳聚糖复合微球制备固定化葡萄糖异构酶的方法，其特征在于：这种磁性壳聚糖复合微球制备固定化葡萄糖异构酶的方法为：一、向0.4～0.6mol/L的FeCl230～100ml和FeCl350～100ml中，加入分子量为4000的聚乙二醇6.0～10.0g，在磁力搅拌器下充分溶解，再用氨水调节溶液至pH8～10，继续搅拌30min～50min，用重蒸水洗涤抽滤后真空冷冻干燥即得Fe3O4磁核；二、将壳聚糖粉末在3％～6％乙酸中超声分散10min，制0.02～0.08g/ml壳聚糖溶液，通过乳化剂与Fe3O4磁核超声分散并电动搅拌10min进行混合，使之形成微乳体系，并与1％～5％戊二醛交联在2000r/min下继续搅拌2～4h，然后用石油醚、丙酮和重蒸水洗涤，抽滤真空冷冻干燥后即得磁性壳聚糖复合微球；三、将制备好的磁性壳聚糖复合微球先用磷酸缓冲液pH7.0～7.8浸泡，抽滤后加入用缓冲液稀释后的浓度为4mg/ml～16mg/ml的葡萄糖异构酶15～20ml，在室温摇床上振荡4～10h，取出放入4℃静置过夜，倾出上清液，沉淀用蒸馏水洗涤再用上述磷酸缓冲液洗涤，直至洗涤液检测不到戊二醛和游离酶，无紫外吸收，抽滤得固定化葡萄糖异构酶。