一种提取禽类全血DNA的方法

摘要

本发明涉及提供一种提取禽类全血DNA的方法。该方法将冷冻血液在室温融化以后，取血液22μl加入离心管，再加入缓冲液860μl、裂解液100μl、蛋白酶K 15μl，总体积不超过1000μl，按本发明提取方法得到DNA后，置于真空干燥器中或45℃烘箱中干燥DNA沉淀物，待团块透明后，视沉淀大小，加入100～200μl TE溶液充分溶解DNA，-20℃冰箱中保存。本发明的提取方法在整个提取过程中不会涉及到苯酚等剧毒药品的使用，对操作人员身体无伤害，相对于现有的提取方法更安全；整个提取过程耗费时间最快4小时内即可完成，提取时间短，相对于现有提取方法更为快速；本发明的提取方法只需要微量的抗凝血即可完成DNA的提取，相对于现有方法更为高效。

主权项

一种提取禽类全血DNA的方法，其特征在于，包括下述步骤：1)冷冻血液在室温融化以后，取血液22μl加入离心管，再加入缓冲液860μl、裂解液100μl、蛋白酶K15μl，总体积不超过1000μl；漩涡振荡5分钟，使其完全混匀；2)56℃金属浴或水浴消化至少3小时；3)加入预冷的氯仿500μl，旋转混合5分钟，使其完全混匀；4)13000r/min离心5分钟，吸取上层水相；5)在上清液中加入等体积预冷的的异丙醇，缓慢摇动离心管5分钟；6)13000r/min离心5分钟，使DNA贴到离心管壁上，弃上清液；7)用预冷的70％乙醇洗涤沉淀物2次，每次洗涤后，13000r/min离心8分钟，弃上清液；8)于真空干燥器中或45℃烘箱中干燥DNA沉淀物，待团块透明后，视沉淀大小，加入100～200μl TE溶液充分溶解DNA，-20℃冰箱中保存。