从亚油酸异构酶产生菌中提取纯化亚油酸异构酶的方法

摘要

本发明公开了一种从亚油酸异构酶产生菌中提取纯化亚油酸异构酶的方法。该方法包括：1)用超高压均质法破碎亚油酸异构酶产生菌的菌体细胞，得到均质液，将该均质液进行离心，收集含有蛋白质的上清液得到粗酶液；2)进行(NH4)2SO4饱和度为60-90％的(NH4)2SO4分级沉淀，收集沉淀，用磷酸钾缓冲液悬浮，得到粗酶液；3)将粗酶液进行进行离子交换层析；所述离子交换层析采用pH为5.5-7.0、摩尔浓度为0.1-0.7mol/L的NaCl溶液进行线性洗脱将酶液进行凝胶过滤层析，收集具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液；4)用摩尔浓度为0.08-0.15mol/L、pH为5.5-7.0的磷酸钾缓冲液进行透析脱盐；5)进行凝胶过滤层析，所述凝胶过滤层析中采用的洗脱液为摩尔浓度为0.08-0.15mol/L、pH为5.5-7.0的磷酸钾缓冲液得到亚油酸异构酶。

主权项

一种从亚油酸异构酶产生菌中提取纯化亚油酸异构酶的方法，包括以下步骤：1)用超高压均质法破碎亚油酸异构酶产生菌的菌体细胞，得到均质液，将该均质液进行离心，收集含有蛋白质的上清液得到粗酶液；所述超高压均质法的均质工作压力为130-160MPa，均质阀片直径为0.05-0.15mm；2)将步骤1)得到的粗酶液进行(NH4)2SO4饱和度为40-90％的(NH4)2SO4分级沉淀，收集沉淀，用磷酸钾缓冲液悬浮，得到酶液；所述磷酸钾缓冲液的摩尔浓度为0.08-0.15mol/L、pH为5.5-7.0；3)将步骤2)得到的酶液进行离子交换层析，所述离子交换层析采用pH为5.5-7.0、摩尔浓度为0.1-0.7mol/L的NaCl溶液进行线性洗脱，收集具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液；所述离子交换层析采用的层析柱为DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱；4)将步骤3)得到的具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液用摩尔浓度为0.08-0.15mol/L、pH为5.5-7.0的磷酸钾缓冲液进行透析脱盐；5)将经过步骤4)透析的酶液凝胶过滤层析；所述凝胶过滤层析中采用的洗脱液为摩尔浓度为0.08-0.15mol/L、pH为5.5-7.0的磷酸钾缓冲液，得到亚油酸异构酶；所述凝胶过滤层析采用的凝胶层析柱为Sephacryl 200HR；所述亚油酸异构酶产生菌为乳酸杆菌属(Lactobacillus)中的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974。