一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法

摘要

一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法，特征是该方法在温度为20℃条件下进行以下各步骤：先以3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯与R-藻红蛋白摩尔比为40∶1进行R-藻红蛋白的衍生化，摇床避光低速振荡2小时，用Sephadex G-25脱盐柱收集衍生化的R-藻红蛋白；再以二硫苏糖醇与抗体摩尔比为500∶1进行抗体的巯基化，摇床低速振荡1小时，用Sephadex G-25脱盐柱收集巯基化的抗体；最后按衍生前R-藻红蛋白与抗体的质量比3∶5的比例取衍生化的R-藻红蛋白与巯基化的抗体混合，摇床低速震荡12小时，后加入100μl的N-乙基马来酰亚胺，反应30分钟，接着以Sephacryl S-300HR层析柱分离纯化，洗脱液为50mmol/L磷酸盐缓冲液+150mmol/L氯化纳、pH7.0，收集分离的交联产物，即为条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针。

主权项

一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法，其特征在于该方法在温度为20℃条件下进行以下各步骤：(1)以3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯与R-藻红蛋白摩尔比为40∶1进行R-藻红蛋白的衍生化，摇床避光低速振荡2小时，用Sephadex G-25脱盐柱收集衍生化的R-藻红蛋白；(2)以二硫苏糖醇与抗体摩尔比为500∶1进行抗体的巯基化，摇床低速振荡1小时，用Sephadex G-25脱盐柱收集巯基化的抗体；(3)按衍生前R-藻红蛋白与抗体的质量比3∶5的比例取衍生化的R-藻红蛋白与巯基化的抗体混合，摇床低速震荡12小时，后加入100μl的N-乙基马来酰亚胺，反应30分钟，接着以Sephacryl S-300HR层析柱分离纯化，洗脱液为50mmol/L磷酸盐缓冲液+150mmol/L氯化纳、PH7.0，收集分离的交联产物，即为条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针。