一种对虾肠道微生物DNA的提取方法

摘要

本发明属于微生物学和分子生态学领域，具体涉及一种对虾肠道微生物DNA的提取方法。具体为过程采用液氮研磨，机械力破壁，溶菌酶，SDS裂解液裂解细胞，然后经分离、析出得到DNA沉淀，最后用TE溶解得到质量较好的DNA。本发明得到的产物DNA片段大于20Kb，可进行基因扩增和测序。本发明通用性好，适用于各种甲壳类水产动物肠道微生物DNA提取，仅一次提取即得到高质量的模板DNA，不需要重复实验，所获得的DNA可用于分子生态学、系统进化等研究。

主权项

一种对虾肠道微生物DNA的提取方法，其特征在于：1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨，并加入0.8-1.2mL PBS、15-25μL PVPP匀浆和200-300μL 0.5％Tween-80，均匀后吹打洗脱3-5min；2)将洗脱液在200g离心5-10min，取上清菌液待用；沉淀中加0.8-1.2mL PBS以200g离心取上清菌液，将两次离心所得上清菌液合并，合并上清液以300g离心5-10min，取上清菌液待用；3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min，收集上清菌液；4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μLCTAB提取液和10-15μL溶菌酶，放入37℃摇床，振荡30-40min；而后加15-20μL 20％(W/C)SDS和10-15μL蛋白酶K，60-70℃水浴1-2h；5)将水浴后菌液在4℃ 3200g离心8-15min，取上清菌液，而后加100-150μL CTAB液和20-25μL 20％SDS混匀后，涡旋，60-70℃水浴10-15min；6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min，取上清菌液，而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液，14000g离心10-15min，取上清菌液待用；7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇，而后于-20℃静置1-2h，再以4℃ 14000g离心10-15min，所得沉淀待用；8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μL 70％预冷乙醇，14000g离心10-15min，所得沉淀即为对虾肠道微生物DNA。