| 摘要 |
Способ анализа генетического полиморфизма для проведения постнатальной ДНК-диагностики муковисцидоза, включающий мультиплексную амплификацию популяций мутаций гена в клиническом образце ДНК «гнездовой» двухэтапной полимеразной цепной реакцией с использованием набора праймеров, отличающийся тем, что мультиплексную амплификацию проводят в гене муковисцидоза CFTR и анализируют 14 наиболее значимых мутаций 1677delTA, W1282X (R), 2143delT, G542X, R553X, G551D, 2184InsA, N1303K, 394DelTT, R334W, R347P, CFTR del21kb, delF508, двухэтапную ПЦР проводят с использованием набора уникальных праймеров, при этом в одну реакционную пробирку объединяют в виде блочной группировки до 4-х пар праймеров, праймеры первого этапа подбирают со средней температурой плавления 58-59°С в 50 мМ формамиде, праймеры второго с температурой 58-61°С так, чтобы сила энергии гибридизации между праймерами внутри одного мультиплекса не превышала бы 12 ккал/моль, причем праймеры в мультиплексах подбирают с учетом отсутствия внутренних вторичных структур. |
