动物虫媒病多重RT-PCR鉴别检测试剂及制备方法和应用

摘要

本发明涉及生物技术领域。尤其是一种能够同时鉴别检测四种动物虫媒病的试剂，以及这种试剂的制备方法和应用。本发明所述的动物虫媒病多重RT-PCR鉴别检测试剂包含四对特异性引物，BTV、EHDV、VSV、AKV各自的扩增目标片段长度为351bp、536bp、300bp和250bp。本发明系分别选择蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水泡性口炎病毒(VSV)、赤羽病病毒(AKV)的VP7和N基因的保守片段为靶目标，应用primer Express软件和primer prere5.0软件，设计合成引物。将设计的多对引物进行最佳配对筛选实验和多重RT-PCR试验，并经过大量的反应条件优选、对比试验和验证试验，得到如上所述的可进行四种动物虫媒病鉴别检测的扩增效率高和特异性好的四对引物。本试剂所组成的试剂盒可在收到样品后6小时之内作出定性、鉴别检测结果。该多重RT-PCR鉴别检测试剂是一种检测临床样品中BTV、EHDV、VSV、AKV的敏感和可靠的方法。

主权项

一种动物虫媒病多重RT-PCR鉴别检测试剂，其特征在于包含四对特异性引物，BTV、EHDV、VSV、AKV各自的扩增目标片段长度为351bp、536bp、300bp和250bp，引物序列为：BTV引物：BTV-P1：5’-CTTCCTTGAAACTGAGGAAACCTT-3’ BTV-P2：5’-ATTTGCACCATCGCATTCTG-3’；EHDV引物：EHDV-P1：5’-CCAGAATGTTACTACATCAATCGTATCCT-3’ EHDV-P2：5’-GGCGCCAATACGCTAAAGG-3’；VSV引物：VSV-P1：5’-GGCTTCCCATCTACATCCTAGG-3’ VSV-P2：5’-TGCCCAAATGTTGCAAGTG-3’；AKV引物：AKV-P1：5’-CAACGATGTTCCACAACGG-3’ AKV-P2：5’-GGCAGTGTCTGACACTGGATT-3’。