一株有机磷农药降解菌的培养方法

摘要

本发明涉及一种培养高效降解有机磷农药的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的方法，属于生物技术领域。其特征在于：发酵培养基以甘薯淀粉废水为主要营养物质来源，培养步骤包括：培养基配制、菌种活化、液体种子制备、液态发酵、菌剂制备。由本发明技术方案生产的有机磷农药降解菌剂能高效原位降解植物叶片上有机磷农药残留，保障食品安全；本发明技术方案还能有效资源化甘薯淀粉废水，减少高浓度废水排放，保护生态环境。

主权项

一种培养高效降解有机磷农药的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的方法，其特征在于：发酵培养基以甘薯淀粉废水为主要营养物质来源，培养步骤包括：(1)培养基配制：1)菌种保藏培养基(固体)：硫酸铵1～3g，磷酸氢二钾1～2g，硫酸镁0.1g，琼脂20g，加甘薯淀粉废水至1L，pH7.0-7.5；2)菌种活化培养基(液体)：硫酸铵1～3g，磷酸氢二钾1～2g，硫酸镁0.1g，加甘薯淀粉废水至1L，pH7.0-7.5；3)种子培养基(液体)：硫酸铵10～30g，磷酸氢二钾10～20g，硫酸镁1.0g，加甘薯淀粉废水至10L，pH7.0-7.5；4)发酵培养基(液体)：硫酸铵0.1～0.5kg，磷酸氢二钾0.1～0.4kg，硫酸镁20g，加甘薯淀粉废水至200L，pH7.0-7.5；以上培养基均在121℃灭菌15-30min。(2)菌种活化：挑取斜面保存的有机磷农药降解菌至菌种保藏培养基平板，35℃连续划线、挑单菌落培养两次后，挑取单菌落在菌种活化培养基中，于35℃，150-200r/min摇床振荡培养12-24h；(3)液体种子制备：向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5％-10％的接种量接种步骤(2)活化的有机磷农药降解菌，于25-37℃，通空气培养12-24h，得到液体种子。(4)液态发酵：向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5％-10％的接种量接种步骤(3)制备的有机磷农药降解菌液体种子，于25-37℃，通空气培养18-60h，得到活菌体培养物，菌体浓度达到50亿CFU/mL以上。(5)菌剂制备：培养好的发酵液经细菌计数后，加入甘氨酸(质量分数0.3％-2％)和甘油(质量分数0.5％-5％)，灌装保藏。使用时用水稀释500-1000倍。