麦秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法

摘要

本发明涉及一种麦秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，包括：(1)将粉碎的麦秆用酸溶液浸泡，在100-150℃条件下水解；(2)配制发酵培养基，调节pH值为4.0-5.0；(3)取菌丝体接入液体种子培养基，待形成白色菌丝群但尚未浮出水面时，将菌丝体和培养基全部转移到含有无菌玻璃珠的容器中，震荡破碎，以3-15％的接种量接入发酵培养基；(4)培养4-6天，加入草酸，培养0.5-6天后获取菌丝体；菌丝体经液氮冷冻后研磨破碎，用醋酸缓冲液提取菌丝碎片，离心。本发明方法简单，易于操作，成本低，且碳源的制备可控性强，含糖量稳定。

主权项

一种麦秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，包括：(1)将粉碎的麦秆按照固液比为1g∶5-15ml用酸溶液浸泡10-20h，在100-150℃条件下水解反应20-60min，离心去除残渣后，得到麦秆水解液，并用DNS法测定水解液中还原糖含量；(2)按7-30g/L的还原糖量，将麦秆水解液配制成发酵培养基，调节pH值为4.0-5.0，过滤除去杂质，并添加氮源和无机盐，再检查并调节pH值至4.0-5.0，灭菌后备用；(3)取2-3片直径为9～11mm含菌丝体的琼脂固体培养基，接入液体种子培养基，于30℃静置培养4-6天；待菌丝体在液体培养基上方形成白色菌丝群但尚未浮出水面时，将菌丝体和培养基全部转移到含有无菌玻璃珠的容器中，对菌丝体进行震荡破碎获得含有菌丝碎片的悬浊液，以3-15％的接种量接入上述发酵培养基，在20-30℃和100-250rpm转速条件下培养4-6天；(4)待菌丝球形成时，加入终浓度为5-20mM的草酸诱导草酸脱羧酶的产生，培养0.5-6天后获取菌丝体；菌丝体经液氮冷冻后研磨破碎，用0.2M，pH3.7的醋酸缓冲液提取菌丝碎片，离心去除残渣，所得上清液即为草酸脱羧酶粗酶液。