干酪乳杆菌Zhang微胶囊及其制备方法与它们的用途

摘要

本发明涉及一种干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)CGMCC No.1697的微胶囊包埋制备方法，该方法的步骤是干酪乳杆菌菌种活化、培养基的配制、菌种发酵液的制备、微胶囊壁材溶液的制备、微胶囊包埋液的制备与微胶囊的制备等。与未包埋的干酪乳杆菌相比，采用本发明方法制备的干酪乳杆菌微胶囊在人工消化液中处理后存活的活菌数可提高1个数量级以上。在温度37℃下贮存30天后，其存活的活菌数也可提高1个数量级以上。因此，本发明干酪乳杆菌微胶囊可以大大提高益生菌在加工、贮藏、运输过程中的功效。

主权项

一种干酪乳杆菌Zhang的微胶囊方法，其特征在于该方法步骤如下：a、菌种活化：将冷冻保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)CGMCC 1697接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养18-24小时，如此传代培养1-2次得到所述的活化干酪乳杆菌Zhang菌种；b、培养基的配制：首先，分别称取下述原料：60-90重量份一水合葡萄糖、8-12重量份酵母粉、8-12重量份大豆蛋白胨、3.0-3.5重量份磷酸氢二钾、13-15重量份乙酸钠、2.0-2.5重量份柠檬酸钠、0.8-1.0重量份MgSO4·7H2O、0.04-0.08重量份MnSO4·5H2O与0.8-1.0重量份吐温-80；然后，将上述原料溶于1000重量份水中，搅拌均匀，使用中和剂将其pH值调节到6.4-6.6，再在温度120-122℃下灭菌15分钟，这样得到所述的培养基；c、菌种发酵液的制备：以使用所述的培养基重量计，按照1-3重量％将步骤a)得到的活化干酪乳杆菌Zhang菌种接种于在步骤b)得到的所述培养基中，在温度37℃下培养8-10小时得到干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液；d、微胶囊壁材溶液的制备：称取8-12重量份壁材粉，并将所述粉溶于1000重量份水中，搅拌均匀，再使用中和剂将其pH值调节到6.9-7.1，这样得到8-12重量％所述的微胶囊壁材溶液；所述的微胶囊壁材选自乳清蛋白、海藻酸钠或脱脂乳粉；e、微胶囊包埋液的制备：步骤d)得到的所述微胶囊壁材溶液，或者在温度80-90℃的条件下保持搅拌15-45min，然后使用冰水冷却到室温；或者直接使用冰水冷却到室温；这样得到的微胶囊包埋液于温度4℃条件下贮存过夜；f、微胶囊的制备将步骤c)得到的菌种发酵液以4500-5500rpm进行离心4-6min，分离培养液，收集菌体，再用PBS缓冲液清洗2-3次，洗去残留培养液；以该菌体体积计，往收集的菌体中加入2-4倍体积的PBS缓冲液，用振荡器振匀，使之再悬浮；而后往菌株重悬液中加入在步骤e)得到的微胶囊包埋液，同时还加入浓度为5-25mM的选自CaCl2、NaCl或GDL的微胶囊形成诱导物溶液，以重量计，所述微胶囊壁材与菌体的重量比为3∶7至7∶3；所述微胶囊形成诱导物与菌体的重量比为0.29-4.45∶1000；然后将上述混合液放入37℃摇床中于180rpm培养4小时，再将该混合液冷却到4℃，并用液氮进行冷冻，使用真空冷冻干燥机进行冻干处理48-72h，得到所述的干酪乳杆菌Zhang的微胶囊。