一种生产长春花生物碱的方法

摘要

本发明公开了一种生产长春花生物碱的方法。该方法，包括下述步骤：1)将长春花的外殖体进行脱分化培养得到长春花愈伤组织并经过继代培养获得疏松快速生长的细胞系；2)将步骤1)所获得的长春花愈伤组织细胞系在添加秋水仙碱的基本培养基中诱导培养得到多倍体细胞系，然后进行扩增培养获得大量长春花多倍体细胞；3)将步骤2)得到的长春花多倍体细胞接种于合成培养基中培养得到富含长春花次生代谢产物的细胞。本发明的方法用长春花细胞培养生产长春质碱，可稳定的实现长春质碱的工业化生产，并且其生产成本较低，培养周期短，不受自然环境以及气候的影响，可以实现周年生产。

主权项

一种生产长春质碱的方法，包括下述步骤：1)将长春花的外植体进行脱分化培养得到长春花愈伤组织并经过继代培养获得疏松快速生长的细胞系；所述长春花的外植体为长春花的幼茎、节间或叶片；所述脱分化培养用培养基为在MS基本培养基的基础上添加1.0-5.0mg/L吲哚乙酸，1.0-5.0mg/L细胞分裂素6-BA，20-40g/L蔗糖的培养基；所述脱分化培养为在18-25℃，光照强度为1000-3000Lux，每日10-16小时照光条件下进行培养3-4周；所述继代培养用培养基为在MS基本培养基中添加20-60g/L蔗糖，1.0-5mg/L植物细胞生长素NAA和1.0-5mg/L植物细胞分裂素6-BA的培养基；所述继代培养的条件为20-25℃，避光条件下培养；2)将步骤1)所获得的长春花愈伤组织细胞系在添加浓度为10-40mg/L的秋水仙碱的MS基本培养基中诱导培养得到多倍体细胞系，然后进行扩增培养获得大量长春花多倍体细胞；所述诱导培养是在20-30℃，避光，80-120rpm/分转速的摇床上振荡培养3-7天；所述扩增培养用培养基为在MS基本培养基的基础上添加了1.0-5mg/L的NAA，1.0-5mg/L的6-BA，质量百分含量为2-6％的蔗糖而得到的培养基；所述扩增培养是在20-25℃，避光条件下培养3-4周；3)将步骤2)得到的长春花多倍体细胞接种于合成培养基中培养得到富含长春花生物碱的细胞；所述合成培养基为在MS基本培养基中添加1.0-5mg/L萘乙酸、30-60g/L蔗糖、10-50mg/L色氨酸、50-200mg/L谷氨酰胺、1-3mg/L辅酶A、2.1-8.4mg/L萘普生、0.15-0.30mg/L阿司匹林、1-5mg/L布诺芬得到的培养基；所述培养是在25-30℃，黑暗条件下，80-120rpm的摇床或大型生物反应器中培养3-7天。