一种制备菊粉酶的生产方法

摘要

一种制备菊粉酶的生产方法包括孢子悬液的制备、液体种子的制备、黑曲霉发酵液的制备和菊粉酶制品的制备四个步骤。将黑曲霉菌种接种到斜面培养基上培养制得孢子悬液。将孢子悬液接入所述28～30℃的液体种子培养基中进行培养得到液体种子。在无菌状态下按体积比3～7％的接种量将液体种子接入黑曲霉发酵基中进行发酵，在一定发酵条件下的0～60h时间段内开启超声发射装置对黑曲霉发酵基和液体种子进行超声辐照培养，超声辐照培养进行完后继续无超声培养得到黑曲霉发酵液。采用盐析法将菊粉酶从黑曲霉发酵液中沉淀出来，经压滤机过滤废液，滤饼烘干，得到菊粉酶制品。生产方法简单、稳定，节约了生产成本，提高了菊粉酶产量。

主权项

一种制备菊粉酶的生产方法，其特征在于：该生产方法包括孢子悬液的制备、液体种子的制备、黑曲霉发酵液的制备和菊粉酶制品的制备四个步骤，各步骤分述如下：I、孢子悬液的制备将黑曲霉菌种接种到斜面培养基上并放于28℃的恒温箱中恒温培养3～4天生成孢子，取出孢子后加入浓度为0.85％的无菌生理盐水洗涤孢子制得孢子悬液；再用浓度为0.85％的无菌生理盐水稀释孢子悬液至每毫升液体中孢子数为107个备用；所述斜面培养基构成为蛋白胨10g/L、菊粉40g/L和琼脂20g/L；II、液体种子的制备将液体种子培养基加热到121℃并灭菌20min后冷却至28～30℃备用，按体积比3～6％的接种量将孢子悬液接入所述28～30℃的液体种子培养基中进行培养，在200～300转/分的摇床上培养14～24h得到液体种子；所述液体种子培养基构成为酵母粉10～20g/L、蛋白胨10～20g/L和菊粉30～50g/L；III、黑曲霉发酵液的制备在发酵罐中加入黑曲霉发酵基，黑曲霉发酵基加入量是发酵罐容积的70～75％，然后往发酵罐中通入121℃的蒸汽对黑曲霉发酵基灭菌15min后冷却至28～30℃备用，在无菌状态下按体积比3～7％的接种量将液体种子接入黑曲霉发酵基中进行发酵，发酵的温度控制在24～40℃，发酵的搅拌速度控制在150～200转/分，发酵的通风量控制在0.3～2.0vvm；在所述发酵条件下的0～60h时间段内开启超声发射装置对黑曲霉发酵基和液体种子进行超声辐照培养，超声辐照培养进行完后继续无超声培养，超声辐照培养时间+无超声培养时间控制在70～100h得到黑曲霉发酵液；所述黑曲霉发酵基按重量百分比构成如下：玉米粉水溶液2～10％，豆饼粉2～10％，磷酸氢二钾1.5～5％，氯化钙1～8％，硫酸氨2-8％，其余为水；黑曲霉发酵基的pH值为5.5-7.0；IV、菊粉酶制品的制备采用盐析法，或采用喷雾干燥法，或采用普通干燥法，或采用絮凝-超滤法将菊粉酶从黑曲霉发酵液中沉淀出来，经压滤机过滤废液，滤饼烘干，得到菊粉酶制品。