用金纳米粒子检测单链DNA碱基突变的方法

摘要

用金纳米粒子检测单链DNA碱基突变的方法，涉及一种基因突变的检测。提供一种用金纳米粒子检测单链DNA碱基突变的方法。制备胶体金，与单链DNA作用形成胶体金与单链DNA复合体系，加入盐酸，复合体系颜色由红变为紫或蓝。利用野生型单链DNA和突变型单链DNA的序列差异，通过复合体系最终颜色的变化或紫外可见吸收光谱最大吸收峰红移位置的不同判定单链DNA是否发生突变。单链DNA和金纳米粒子均无需作任何修饰，不需特殊仪器，可对单碱基突变检测，最低检测限为10fmol，能在30min内提供检测结果，具有简便、快速、低成本、高灵敏度、高特异性等特点，实用性强，临床上具有较大的应用潜力。

主权项

用金纳米粒子检测单链DNA碱基突变的方法，其特征在于具体步骤如下：1)制备胶体金：将氯金酸溶液和柠檬酸三钠溶液的混合液加热至沸腾，反应完成后冷却至室温，离心，浓缩，加入水重新分散，得胶体金，所述的混合液中，氯金酸的浓度为0.01％，柠檬酸三钠的浓度为0.02％～0.05％，所述的胶体金的粒径为10～30nm；2)取野生型单链DNA 10～50fmol加入到40～50μL胶体金中，混匀后得胶体金与野生型单链DNA复合体系；3)取突变型单链DNA 10～50fmol加入到40～50μL胶体金中，混匀后得胶体金与突变型单链DNA复合体系；4)在步骤2所得的胶体金与野生型单链DNA复合体系中加入2～4μL 1mol/L的盐酸，混匀后发生团聚，作紫外可见吸收光谱检测，胶体金与野生型单链DNA复合体系的紫外可见吸收光谱最大吸收峰发生红移，发生红移后的胶体金与野生型单链DNA复合体系的紫外可见吸收光谱最大吸收峰称之为吸收峰1；5)在步骤3所得的胶体金与突变型单链DNA复合体系中加入2～4μL 1mol/L的盐酸，混匀后发生团聚，作紫外可见吸收光谱检测，胶体金与突变型单链DNA复合体系的紫外可见吸收光谱最大吸收峰发生红移，发生红移后的胶体金与突变型单链DNA复合体系的紫外可见吸收光谱最大吸收峰称之为吸收峰2；6)当吸收峰2与吸收峰1有明显差异时，据此可以判断有突变发生。