圆斑蝰蛇蛇毒凝血X因子激活酶及其提取方法与应用

摘要

本发明公开了一种圆斑蝰蛇蛇毒凝血X因子激活酶及其提取方法与应用。其目的是提供一种来源于圆斑蝰蛇蛇毒的凝血X因子激活酶及其提取方法与其在制备止血药和治疗出血性疾病的药物中的应用。该酶是将圆斑蝰蛇蛇毒依次进行DEAE-SephadexA-50离子交换层析、透析、纤维素DEAE-32离子交换层析和Superose-12凝胶过滤层析后收集的具有凝血X因子激活酶活性活性的蛋白。可以本发明的凝血X因子激活酶为活性成分制备治疗外科出血、内科出血、妇产科出血、五官科出血、儿科出血和组织活检后出血等临床出血及出血性疾病的药物，将在生物制药领域发挥重要作用，应用前景广阔。

主权项

一种提取凝血X因子激活酶的方法，包括以下步骤：1)将圆斑蝰蛇蛇毒溶于pH7.6-8.0、0.04-0.06mol/L的Tris-HCl缓冲液中，得到浓度为200-300g/L的圆斑蝰蛇蛇毒液；2)对步骤1)获得的圆斑蝰蛇蛇毒液进行离子交换柱层析，固相填充物为DEAE-SephadexA-50，直线梯度洗脱，洗脱液为含氯化钠的pH7.6-8.0、0.04-0.06mol/L的Tris-HCl缓冲液；3)收集洗脱液，在280nm的波长下对洗脱液进行紫外分光光度计检测，得到波长280nm吸收图谱，收集各吸收峰中具有凝血X因子激活酶活性的部分；4)将步骤3)获得的具有凝血X因子激活酶活性收集液封闭在截留分子量为12000D-14000D的透析袋中，放入蒸馏水中透析12-16小时，所述蒸馏水的体积为收集液体积的10-12倍；5)将步骤4)透析后的收集液进行离子交换柱层析，固相填充物为纤维素DEAE-32，洗脱液为含氯化钠pH7.6-8.0、0.04-0.06mol/L的Tris-HCl缓冲液直线梯度洗脱；6)收集洗脱液，在280nm的波长下对洗脱液进行紫外分光光度计检测，得到波长280nm吸收图谱，图谱应呈现两组吸收峰，弃去第一吸收峰，保留第二吸收峰的组分；7)冻干；8)将步骤7)获得的冻干粉用注射用水复溶；9)将复溶液进行凝胶过滤层析，固相填充物为Superose-12，洗脱液为注射用水；10)收集洗脱液，在280nm的波长下对洗脱液进行紫外分光光度计检测，得到波长280nm吸收图谱，收集具有凝血X因子激活酶活性的部分，得到凝血X因子激活酶原液。