一种应用淀粉生产乙醇的方法

摘要

本发明公开了一种应用淀粉生产乙醇的方法，属于生物技术领域，首先从大麦基因组中扩增α淀粉酶基因，从黑曲霉菌基因组中扩增糖化酶基因，从解淀粉假单胞杆菌基因组中扩增异淀粉酶基因；利用α淀粉酶基因、糖化酶基因和异淀粉酶基因构建成酿酒酵母工程菌；将淀粉蒸煮使糊化后，以糊化的淀粉为原料，应用所构建并筛选出的酿酒酵母工程菌于28-30℃进行发酵生产乙醇。本发明采用了构建酿酒酵母工程菌而同步剪切淀粉支链，以及同步糖化淀粉生产乙醇的方法，省略了需要生产成本高的系列酶的生产，能够较大程度地降低利用淀粉生产乙醇的成本，解决应用淀粉生产乙醇的高成本问题，有利于促进应用淀粉生产乙醇产业的发展。

主权项

一种应用淀粉生产乙醇的方法，其特征在于，其步骤如下：1)、从大麦基因组中扩增α淀粉酶基因，从黑曲霉菌基因组中扩增糖化酶基因，从解淀粉假单胞杆菌基因组中扩增异淀粉酶基因；2)、构建由酿酒酵母的磷酸甘油酸盐激酶基因启动子分别调控α淀粉酶基因和糖化酶基因的酿酒酵母表达载体，构建由酿酒酵母的交配信息素启动子调控异淀粉酶基因的酿酒酵母表达载体，并将表达载体转化为酿酒酵母基因组；3)、用PCR方法扩增目标基因验证重组子：分别合成α淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶的基因特异引物，分别以重组子和没有转化这些基因的酿酒酵母基因组DNA为模板，进行PCR扩增；根据宿主菌没有扩增出目标大小的PCR扩增带而重组子能扩增出目标大小的PCR扩增带证明所测的目标基因是已经重组于重组子的基因组；4)、用测定表达产物各种酶的活性的方法筛选出每种酶活力大于1.2μ/ml发酵液的重组子为工程菌；5)、将淀粉蒸煮使糊化；6)、以糊化的淀粉为原料，应用所构建并筛选出的酿酒酵母工程菌于28-30℃进行发酵生产乙醇。