一种完整肽聚糖及其制备方法

摘要

本发明公开了一种完整肽聚糖，因所提取肽聚糖空间结构完整，能有效抑制肿瘤生长，可广泛应用于抗肿瘤药物。本发明还公开了一种提取完整肽聚糖的方法，通过抽提磷壁酸使细胞膜通透性增加，脱脂去除胞膜上的脂肪类物质，用酶解液去除细胞内的蛋白质类物质，最后通过离心清洗去除杂质后冻干即获得的完整肽聚糖。本发明的优点在于：因能提取完整肽聚糖，其细胞壁结构完整，具有良好的抗肿瘤作用。制备方法实用性强、操作简单、周期短、步骤简便合理，具有成本低、产率高、适宜规模化生产等优点。

主权项

一种完整肽聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)菌体的清洗与收集步骤：取保加利亚乳杆菌湿菌体100重量份，按1克重量份比10毫升体积份的比例加入1000体积份生理盐水，通过离心分离，800克力离心10分钟，弃去沉淀；将获得的上清液4000克力离心30分钟，弃去上清液，得到湿菌体；(2)磷壁酸的去除步骤：取收集到的所述湿菌体，按1克重量份所述湿菌体比10毫升体积份的8％三氯乙酸溶液比例均匀混合后，于50℃水浴加热3小时，通过4000克力离心30分钟，弃去上清液，取得沉淀物；(3)脱脂步骤： a、将所述沉淀物，按1克重量份所述沉淀物比2毫升体积份甲醇的比例，加入100％浓度甲醇中，摇匀，4000克力离心30分钟，弃去上清液，得到一次沉淀物；b、将所述一次沉淀物，按1克重量份所述一次沉淀物比2毫升体积份丙酮的比例，加入100％浓度丙酮中摇匀，4000克力离心30分钟，弃去上清液，得到二次沉淀物；c、将所述二次沉淀物，按1克重量份所述二次沉淀物比2毫升体积份无菌水的比例，加入无菌水中摇匀，4000克力离心30分钟，弃去上清液，得到脱脂沉淀物；(4)酶解步骤a、按克重量份比毫升体积份的比例，取3重量份胃蛋白酶和4重量份胰蛋白酶比4000体积份pH7.2Tris-盐酸缓冲液的比例混合均匀，配制成酶解液；b、取所述脱脂沉淀物，按1克重量份所述脱脂沉淀物比15毫升体积份所述酶解液的比例，加入所述酶解液中摇匀，在37℃水浴加热8小时后，再8000克力离心15分钟，弃去上清液，得到一次酶解沉淀物；c、所述一次酶解沉淀物，按1克重量份所述脱脂沉淀物比15毫升体积份无菌水的比例，加入无菌水中摇匀，8000克力离心15分钟，弃去上清液，得到二次酶解沉淀物；(5)冻干保存步骤a、所述二次酶解沉淀物，按1克重量份所述脱脂沉淀物比5毫升体积份无菌水的比例，加入无菌水中混合均匀，进行真空冷冻干燥至白色絮状粉末，即为保加利亚乳杆菌完整肽聚糖成品。