诱导裙带菜孤雌生殖幼孢子体体细胞产生雌配子体的方法

摘要

本发明公开一种操作简单、成本低廉、所产出的雌配子体成熟率高、可为裙带菜规模化苗种生产提供大量雌配子体的诱导裙带菜孤雌生殖幼孢子体体细胞产生雌配子体的方法，是将室内保存培养的裙带菜雌配子体切碎后放置在适合于其发育成熟的温度、光照及营养盐条件下培养，当雌配子体发育成熟大量形成卵囊并排出卵后，因无精子受精导致大部分未受精卵死亡，少数未受精卵孤雌生殖萌发成幼苗，当孤雌生殖幼苗生长至0.4～0.6cm时，根据细胞全能性的生物学原理，采用切除假根的方法使藻体失去极性和对体细胞的束缚，诱导幼苗体细胞产生雌配子体。

主权项

一种诱导裙带菜孤雌生殖幼孢子体体细胞产生雌配子体的方法，其特征在于按照如下步骤进行：a.取保存培养的裙带菜雌配子体10mg，添加300ml消毒海水后用组织搅拌机切碎至190～210μm藻段形成种雌配子体体液，将种雌配子体体液按1ml/培养皿移至多个培养皿内，添加培养液后在温度为20℃、光照强度为2000Lx、光照时间为12小时/日的条件下培养12天，培养液每3天全量交换1次；b.将生长有孤雌生殖幼苗的培养皿在温度为15℃、光照强度为2000Lx、光照时间为12小时/日的条件下继续培养至孤雌生殖幼苗长度达到0.4～0.6cm，培养液每3天全量交换1次；c.将孤雌生殖幼苗从培养皿底面上剥下，铺在经过灭菌消毒的载玻片上，将幼苗假根从柄的部位去除，将剩余叶片移到烧杯内，添加培养液后在温度为20℃、光照强度为2000Lx、光照时间为12小时/日的条件下培养2个月，培养液每7天全量交换1次；d.将多个生长雌配子体藻团的叶片移到组织捣碎机中，添加培养液后打碎至490～510μm的藻段形成雌配子体体液，叶片湿重与培养液体积比为10mg∶300ml，汲取雌配子体液按1ml/培养皿移至多个培养皿中，添加培养液后在温度为20℃、光照强度为2000Lx、24小时/日温度光照条件下培养2个月；e.将培养皿内的雌配子体藻团置于灭菌后的烧瓶中，添加培养液后在d步骤所述培养条件下增殖和保存培养，培养液每10天交换半量，每10天摇瓶1次，培养2个月，将烧瓶内的雌配子体连同培养液移到2～3个烧瓶内，再添加培养液进行分瓶增殖，获得雌配子体；所述培养液为向1L加热至80℃经过滤后的自然海水中添加NaNO3100mg、NaH2PO4·12H2O 20mg及PI溶液1ml。