一种中华鳖DNA指纹鉴定方法

摘要

本发明涉及到一种中华鳖DNA指纹鉴定方法，其采用的技术方案为：先从中华鳖肌肉中快速提取高纯度的基因组DNA，然后进行随机扩增引物和扩增反应程序的筛选与建立。具体包括以下步骤：(1)肌肉的预处理，包括烘干温度与水分含量等；(2)基因组DNA提取条件的优化，如水浴时间、温度及离心速度与时间等；(3)PCR扩增反应体系与程序的建立，包括模板、引物和酶的加入量等及退火温度、时间及循环次数的设计等；(4)在最佳扩增条件下进行不同随机引物的筛选以建立不同地域中华鳖的分子标记。与常规形态鉴别技术相比，本技术具有快速、准确的特点，不受饲养外界环境条件的影响，可迅速鉴别出具有不同地域特征的中华鳖亲本，为成功开展杂交育种奠定基础。

主权项

一种中华鳖DNA指纹鉴定方法，其特征在于包括下述步骤：①肌肉样品预处理：取待测中华鳖样品肌肉，对该肌肉在40-45℃温度烘干，烘干后的肌肉水分含量为3-5％；②提取基因组DNA：采用试剂盒微量提取法提取上述烘干后的样品肌肉中的基因组DNA，提取条件为水浴温度为50-55℃、水浴时间为40-45min，离心转速为10000-12000r/min、离心时间为5-10min，得到高纯度DNA基因组，该基因组的A260/280为1.7～1.9；③建立PCR扩增反应体系：反应总体积为20-25μL，其中10×Buffer 2-2.5μL、25mMMgCl2 1.6-2.0μL、2mM dNTP0.4-0.5μL、Taq酶0.25-0.4μL、5μM引物2μL、DNA模板1μL；PCR反应的退火温度为36-38℃，循环次数为40-45次；④确立中华鳖特征性分子标记：采用RAPD随机引物S104、S105、S327和S474作为区分不同地域中华鳖的特征性分子标记。