基于线粒体DNA T6680C单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒

摘要

本发明涉及基于线粒体DNA T6680C单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒，其特征是该试剂盒包括以下分离包装的试剂：试剂一，引物混合液；试剂二，PCR反应混合液；试剂三，线粒体DNA的6680位点单核苷酸多态性T对照DNA；试剂四，线粒体DNA的6680位点单核苷酸多态性C对照DNA；试剂五，探针混合液；试剂六，连接反应混合液；试剂七，电泳混合液。本发明使用简单，操作方便，检测快速，能用于平原人进入高原前对高原肺水肿易感者的筛选，指导HAPE的预防和治疗，减轻急性重症高原病的威胁，有利于进入高原人群健康。

主权项

基于线粒体DNA T6680C单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒，其特征是该试剂盒包括以下分离包装的试剂：试剂一，引物混合液，序列如下：上游引物HP2-F：5’-ATCCTACCAGGCTTCGGAAT-3’；下游引物HP2-R：5’-GCCACCTACGGTGAAAAGAA-3’；引物混合液100μl；上游引物HP2-F和下游引物HP2-R各50μl混合，浓度均为10pmol/μl；试剂二，PCR反应混合液1000μl；成分有1×PCR buffer，2.0mMMgCl2，200mM dNTPs，1 U Taq酶，余量为蒸馏水；试剂三，线粒体DNA的6680位点单核苷酸多态性T对照DNA 50μl，浓度为50ng/μl；试剂四，线粒体DNA的6680位点单核苷酸多态性C对照DNA 50μl，浓度为50ng/μl；试剂五，探针混合液120μl，三种探针各40μl混合，该三种探针浓度均为12.5pmol/μl；三种探针序列如下：①P2-F：5’-GTTACAATATGGGAGATTATTCCGATTTTTTTTTTTTTTTT-3’，荧光物FAM标记；②P2-D1：线粒体DNA的6680位点为单核苷酸多态性T：5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTGGTTCTTTTTTTCCGGAGAAGTAA-3’；③P2-D2：线粒体DNA的6680位点为单核苷酸多态性C：5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGTTCTTTTTTTCCGGAGAAGTAG-3’；试剂六，连接反应混合液100μl；成分有pH 7.6的20mM Tris-HCl，25mM醋酸钾，10mM醋酸镁，10mM二硫苏糖醇，1mM氧化型辅酶I，0.1％ TritonX-100，0.5μl Taq DNA连接酶，余量为蒸馏水；试剂七，电泳混合液100μl；荧光物质1×ROX和上样缓冲液6×loadingbuffer各为50μl。