食品中猪肉成分的鉴定方法

摘要

在此研究中，猪肉特异性实时PCR检验发展用以清真食品认证。三种肉类样品被采用，即猪肉，牛肉和鸡肉。这三种家畜的肉是马来西亚经常消费的肉，而且在市场上很容易买到。每种粗制肉样品的DNA利用Blood&Tissue Kit(Qiagen，Hilden，Germany)成功提取。在实时PCR反应前，DNA的浓度采用光度适应计(Eppendorf AG，Hamburg，Germany)利用UV吸收分光光度测量法获得。引物的退火温度为58℃。为了检验所构架的引物的特异性，反应测试了引物与其他两种肉类样品的反应以监测可能的交叉反应。该反应仅在Ct±22.83时扩增猪肉DNA。本发明描述的实时PCR检测被证实在样品测试中，对低监测限度非常敏感。检测通过自100ngDNA开始制备10倍稀释系列，测定反应的灵敏度。灵敏度起始值最高为0.001ng猪肉DNA。已有报道称利用传统PCR检测的检出限为0.1ng猪肉DNA。在这种情况下，本方法对于检测食品中的猪肉DNA是有益处的。

主权项

一种鉴定食品中猪肉成分的方法，该方法包括：(a)从猪肉样本中提取脱氧核糖核酸(DNA)；(b)以猪肉ND5线粒体基因为基础构架一正向引物和反向引物；(c)对该正向引物和反向引物进行聚合酶链反应(PCR)，其中，该正向引物序列为SUS-FWD：5’-AGC TGC ACT ACA AGC AAT CC-3’，该反向引物序列为SUS-RVS：5’-ATG CGT TTG AGT GGG TTA GG-3’。