快速检测日本血吸虫的荧光定量PCR试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速检测日本血吸虫的荧光定量PCR试剂盒，涉及一种人畜共患传染病病原体的基因检测技术，适用于日本血吸虫定性定量检测。本发明由DNA提取液、荧光定量PCR反应液、标准阳性模板PU-SJ、阴性质控标准品组成；荧光定量PCR反应液含有日本血吸虫特异性引物对和荧光探针。本发明定量准确；检测速度快；特异性好，灵敏度高；可鉴定区别检测日本血吸虫和中华血吸虫；使用步骤简单，可重复性高；可以对含有日本血吸虫群全部三个种的核酸样品进行定性定量检测，可以替代传统的病原学方法、检测血吸虫幼虫尾蚴的钉螺压碎法和逸蚴法。

主权项

一种快速检测日本血吸虫的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：由DNA提取液、荧光定量PCR反应液、标准阳性模板pU-SJ、阴性质控标准品组成；荧光定量PCR反应液含有日本血吸虫特异性引物对和荧光探针；正向引物为5′-CACAG ACACG GCTGA AAGGT T-3′，反向引物为5′-TGCTT GTTCA CGGTC TTGGT TA-3′，荧光探针序列为5′-CACTA CGCCG AGCTG ACCAC TGCC-3′；荧光探针5′端标记报告荧光基团FAM，3′端标记不发光的淬灭基团标记Eclipse，标准阳性模板pU-SJ含有日本血吸虫高度保守基团18S rDNA的81个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖；所述的标准阳性模板pU-SJ所包含的18S rDNA基因的核苷酸序列为：CACAGACACGGCTGAAAGGTTGCACAACCACTACGCCGAGCTGACCACTGCCCTGATCGTAACCAAGACCGTGAACAAGCA；所述的PCR即聚合酶链式反应，所述的SJ即日本血吸虫。