检测端粒酶活性的方法和组合物

摘要

本发明公开了检测端粒酶活性的方法，该方法使用引物延伸，随后进行实时PCR定量。本发明的方法提供了快速、灵敏和准确测定生物样品中的端粒酶活性的方法。一实施方案中，该方法包括如下步骤：将生物样品加入反应管中，该反应管含有包括第一引物和核苷三磷酸的第一反应混合物，包括第二引物和DNA聚合酶的第二反应混合物，和分隔第一反应混合物和第二反应混合物的蜡层；用第一反应混合物培养生物样品；将延伸产物和第二反应混合物混合；使用实时PCR和对照模板扩增和定量延伸产物。另一实施方案中，检测方法包括原位引物延伸步骤，使延伸产物在完整细胞中产生。该实施方案中，在合适的条件下可以在完成定量步骤之前将延伸产物保存延长的时间。

主权项

检测和定量生物样品中端粒酶活性的方法，该方法包括步骤：将生物样品加入反应管中，所述反应管含有：包括第一引物和核苷三磷酸的第一反应混合物；包括第二引物和DNA聚合酶的第二反应混合物；和分隔反应管中第一反应混合物和第二反应混合物的蜡层；在适于端粒酶从第一引物产生延伸产物的条件下用第一反应混合物培养生物样品；通过熔化蜡层混合延伸产物和第二反应混合物；在从单个293T细胞检测端粒酶活性的条件下使用实时聚合酶链式反应扩增延伸产物；和使用对照模板定量扩增的延伸产物，其中第一引物是适于作为端粒酶底物的寡脱氧核糖核苷，第二引物含有和端粒重复部分互补的序列。