同时检测新城疫和禽流感病毒的荧光试纸条及应用

摘要

本发明提供了一种同时检测新城疫和禽流感病毒的荧光标记试纸条，属于动物疫病诊断检测方法技术领域。这种荧光标记试纸条，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬，在PVC背衬上依次连续粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫与所述硝酸纤维素膜之间有搭接，所述硝酸纤维素膜与所述吸水垫之间有搭接；所述结合垫上包被有新城疫单克隆抗体-荧光标记物以及禽流感单克隆抗体-荧光标记物，所述硝酸纤维素膜上分别包被有新城疫单克隆抗体和禽流感单克隆抗体构成的两条检测线和羊抗鼠IgG构成的质控线。本发明的试纸条可以同时检测两种病毒，实现了一步多检的检测方法，具有特异性强，灵敏度高，检测时间短(20分钟)，操作简便等优点。

主权项

一种同时检测新城疫新城疫和禽流感病毒的荧光标记试纸条的制备及检测方法，其特征在于其步骤为：1)利用新城疫和禽流感单克隆抗体的杂交瘤细胞株；以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得新城疫单克隆抗体和禽流感单克隆抗体；2)制备尺寸为50nm荧光纳米颗粒作为标记物；3)将步骤1)制备的新城疫和禽流感单克隆抗体分别加入步骤2)制备的荧光纳米颗粒中，得到新城疫单克隆抗体-荧光标记物和禽流感单克隆抗体-荧光标记物；4)将步骤3)制备的新城疫单克隆抗体-荧光标记物和禽流感单克隆抗体-荧光标记物包被在结合垫上；5)将步骤1)纯化后的新城疫和禽流感单克隆抗体包被在硝酸纤维素膜上构成两条检测线；并将羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜上构成质控线；6)在PVC背衬上按顺序依次粘附所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，得到所述用于同时检测新城疫新城疫和禽流感病毒的荧光试纸条；7)将待检测的样品加载样品垫上过滤后，若样品中有NDV，则与结合垫中的荧光标记抗体结合，通过层析作用先与NC膜上的新城疫单克隆抗体结合形成的荧光结合线3，未结合完的荧光标记抗体继续层析与羊抗鼠IgG结合形成第二条荧光质控线；若样品中有AIV与结合垫中的荧光标记抗体结合，通过层析作用先与NC膜上的禽流感单克隆抗体结合形成的荧光结合线4，未结合完的荧光标记抗体继续层析与羊抗鼠IgG结合形成第二条荧光质控线；8)观察结果：阳性则出现两条结合线(出现结合线3和质控线为样品中含有NDV，出现结合线4和质控线为样品中含有AIV)；阴性则仅出现一条质控线；试剂条无效则不出现线条。