发明名称 |
一种基于PCR-DGGE水体蓝藻检测方法及试剂盒 |
摘要 |
本发明公开了一种基于PCR-DGGE水体蓝藻检测方法及其快速检测试剂盒。检测步骤是:A、水样采集浓缩后,通过反复冻融释放出蓝藻DNA,在水浴中静置2min,离心后取1μL上清溶液作为模板DNA加入PCR管;B、按照DGGE装置说明书,制备丙稀酰氨变性梯度胶;C、将模板DNA加入PCR管进行PCR扩增反应;D、将标准DNA marker和PCR产物分别加入不同泳道进行DGGE电泳;E、对电泳结果进行分析鉴定。该方法鉴定速度快,不需对DGGE产物测序,蓝藻鉴别结果准确可靠。水体蓝藻检测试剂盒包括a、PCR相关试剂:蓝藻特异性引物和Taq酶;b、自行制备的蓝藻鉴定标准marker。c、DGGE电泳相关试剂。该试剂盒成分简单,检测成本低,能同时检测多个水样。 |
申请公布号 |
CN101701264A |
申请公布日期 |
2010.05.05 |
申请号 |
CN200910272876.0 |
申请日期 |
2009.11.20 |
申请人 |
深圳大学 |
发明人 |
胡章立;罗文怀 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
武汉宇晨专利事务所 42001 |
代理人 |
王敏锋 |
主权项 |
一种基于PCR-DGGE水体蓝藻检测方法:其步骤是:A、水样采集与处理:从自然水体采集含蓝藻的水样,通过浮游生物网浓缩,倒入分液漏斗静置30sec后,取中间部分的水样进一步离心,将其转入1.5mLEP管中,用去离子水反复洗涤3次后,加入50μL去离子水,反复冻融2次后,再次在-80℃冷冻5min,直接在旋涡仪上Vortex 1min后,在80℃水浴中静置2min,5000rpm/min离心1min,用移液枪取1μL上清溶液作为模板DNA加入PCR反应管;B、变性梯度胶制备:按照DGGE装置说明书,制备丙稀酰氨浓度为8%、变性梯度范围为25%-45%的变性梯度胶;C、PCR反应:取1μL上清溶液作为模板DNA加入PCR管,进行PCR扩增反应,反应条件为94℃预变性5min,94℃40sec,55-58℃、72℃各30sec,循环4次,接着94℃40sec,55℃30sec,72℃30sec,循环27次,接着72℃延伸10min,最后温度降至12℃恒温30min;D、DGGE电泳:将标准蓝藻鉴定DNA marker和PCR产物分别加入不同泳道,以50V-30min,120V-7h的条件进行DGGE电泳;E、分析鉴定:对电泳纬果进行染色、扫描分析,鉴定出水体中蓝藻种类。 |
地址 |
518060 广东省深圳市南山区南海大道3688号 |