发明名称 |
一种黄瓜枯萎病菌分子检测方法 |
摘要 |
一种黄瓜枯萎病菌分子检测方法,它涉及一种黄瓜枯萎病菌检测方法。它解决了现有黄瓜枯萎病菌分子检测中采用PCR-RFLP方法存在真菌通用引物特异性不强及方法繁琐,而采用巢式PCR方法需要2步PCR扩增,易污染的问题。方法:一、引物Fc-1和Fc-2;二、提取染病样品基因组DNA进行PCR扩增;三、将PCR扩增产物进行电泳,然后用凝胶成像系统分析,在315bp处出现特异条带,则染病样品带有黄瓜枯萎病菌,即完成检测。本发明引物Fc-1和Fc-2具有高度特异性,灵敏性高,仅需1步反应在2h内就可获得检测结果,快速、简单,不易污染。 |
申请公布号 |
CN101698882A |
申请公布日期 |
2010.04.28 |
申请号 |
CN200910073197.0 |
申请日期 |
2009.11.12 |
申请人 |
黑龙江省科学院微生物研究所 |
发明人 |
张淑梅;赵晓宇;王玉霞;李晶;张先成;孟利强 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12R1/77(2006.01)N |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109 |
代理人 |
金永焕 |
主权项 |
一种黄瓜枯萎病菌分子检测方法,其特征在于黄瓜枯萎病菌分子检测方法按以下步骤实现:一、根据黄瓜枯萎病菌的核糖体内转录间隔区DNA序列的特性,设计对枯萎病菌具特异扩增作用的一对引物Fc-1和Fc-2;二、提取染病样品基因组DNA,采用引物Fc-1和Fc-2对基因组DNA进行PCR扩增;三、将PCR扩增产物在含GelRed染色剂的1.0%琼脂糖凝胶上用1×TAE缓冲液进行电泳,电泳结束后用凝胶成像系统分析,在315bp处出现特异条带,则染病样品带有黄瓜枯萎病菌,即完成检测;其中步骤一中Fc-1为5`-CATACCACTTGTTGCCTC-3`,Fc-2为5`-ATTAACGCGAGTCCCACC-3`;步骤二中PCR扩增反应体系:25μl反应体系,由10×PCR缓冲液2.5μl,2.5mM dNTP 2μl,10μM引物Fc-11μl、10μM引物Fc-21μl,10ng/μl基因组DNA1μl,Easy Tag DNA Polymerase 1U和余量无菌去离子水组成;步骤二中PCR扩增条件为:94℃预变性5min;然后94℃变性30s,60℃退火1min,72℃延伸1min,共40个循环,最后72℃延伸10min补齐末端,扩增完成;步骤三中电泳的电压为4~5V/cm。 |
地址 |
150010 黑龙江省哈尔滨市道里区兆麟街68号 |