向草坪草人工转接天然禾草中的内生真菌的方法

摘要

一种向草坪草人工转接天然禾草中的内生真菌的方法。包括在无菌条件下将确认无菌的种子接种到水-琼脂培养基表面轻压，将培养皿密封后放到恒温培养箱中暗培养，获得无菌胚芽鞘。人工转接时，先在胚芽鞘靠近上方的部位纵向划一个小口，深度以不戳穿胚芽鞘为准，然后将菌丝注入伤口中，接种后置于培养箱中暗培养；5天后用黑暗和光照交替培养4天，之后移栽到无菌蛭石中，用保鲜膜将花盆口封住，以增加周围空气湿度；移苗一周后将保鲜膜移开，室温培养，1个月后检测感染率。本发明同源转接成功率达93％，异源转接成功率达76％，该方法具有快速、便捷、成本低、成功率高等优点，很好地弥补了现有转接方法中普遍存在的成功率较低的不足。

主权项

一种向草坪草人工转接天然禾草中的内生真菌的方法，其特征在于，该方法包括：第一、无菌胚芽鞘的获得将确认无菌的种子经50％硫酸-5％次氯酸钠进行表面消毒，用无菌水冲洗，接着在无菌条件下将种子接种到由每20g琼脂溶于1000ml水中配制的水-琼脂培养基表面轻压，将培养皿密封后放到恒温培养箱中，25±1℃暗培养；3天后待种子长出胚芽鞘后用于人工转接；第二、人工转接无菌条件下将培养皿置于体视显微镜下，用预先吸入少量无菌水的一次性注射器先在胚芽鞘靠近上方的部位纵向划一个长0.5-1mm的小口，深度以不戳穿胚芽鞘为准，然后用注射器从培养基上挑取内生真菌菌丝，推动注射器将菌丝注入伤口中，接种后置于培养箱中暗培养；5天后用黑暗和光照交替培养4天，之后移栽到无菌蛭石中，用保鲜膜将花盆口封住，以增加周围空气湿度；移苗一周后将保鲜膜移开，室温培养，1个月后检测感染率。