| 摘要 |
1. Способ продукции олигосахаридов, содержащих по меньшей мере один остаток сиаловой кислоты, которые здесь названы сиалилированными олигосахаридами, включающий этап, заключающийся в культивировании микроорганизма в культуральной среде, возможно содержащей экзогенный предшественник, причем указанный микроорганизм содержит гетерологичные гены, кодирующие CMP-Neu5Ac-синтетазу, синтазу сиаловой кислоты, GlcNAc-6-фосфат-2-эпимеразу и сиалилтрансферазу, и при этом были делегированы или инактивированы эндогенные гены, кодирующие альдолазу сиаловой кислоты (NanA) и ManNac-киназу (NanK), причем указанный микроорганизм способен продуцировать внутренне активированную сиаловую кислоту. ! 2. Способ п.1, где гетерологичный ген сиалилтрансферазы выбран из генов для α-2,3-сиалилтрансферазы, α-2,3- и α-2,8-сиалилтрансферазы (cstll) и α-2,6-сиалилтрансферазы. ! 3. Способ по п.1, где гетерологичный ген СМР-Neu5Ас-синтетазы - это neuА, гетерологичный ген синтазы сиаловой кислоты - это neuВ, а гетерологичный ген GlcМАс-6-фосфат-2-эпимеразы - это neuС. ! 4. Способ по п.3, где гены neuА, neuВ и neuС выделены из бактериальных штаммов, содержащих сиалилированную структуру в своей клеточной оболочке, как, например, С.jejuni штамм АТСС № доступа 43438. ! 5. Способ по п.1, где гены nanT, nanA, nanK и nanЕ делегированы или инактивированы (nanKЕАТ-). ! 6. Способ по п.1, где указанный микроорганизм дополнительно кодирует белок, который способствует включению в клетки лактозы, и не имеет ферментов, метаболизирующих лактозу. ! 7. Способ по п.1, где указанный микроорганизм представляет собой штамм Е. coli, который является lacY+(β-галактозид-пермеаза), lacZ- (β-галактозидаза) и, возможно, melA- (α-галактозидаза). ! 8. Способ п� |
