耐热化α-葡聚糖磷酸化酶(GP)的方法

摘要

通过修饰天然α-葡聚糖磷酸化酶获得的耐热化α-葡聚糖磷酸化酶；和制备所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶的方法。所述天然α-葡聚糖磷酸化酶来源于植物。与天然α-葡聚糖磷酸化酶比较，耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在选自下组的至少一个位置具有不同的氨基酸残基：对应基序序列1L或1H的4-位的位置、对应基序序列2的4-位的位置和对应基序序列3L或3H的7-位的位置，并且在20mM柠檬酸盐缓冲液(pH6.7)中在60℃加热10分钟以后，所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在37℃的酶活性是加热之前所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在37℃的酶活性的20％或更多。

主权项

1.耐热化α-葡聚糖磷酸化酶，其通过修饰天然α-葡聚糖磷酸化酶获得，其中所述天然α-葡聚糖磷酸化酶来源于植物，并且其中(1)所述天然α-葡聚糖磷酸化酶具有序列1L：并且所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在序列1L中第4位具有氨基酸残基I、L或V；(2)所述天然α-葡聚糖磷酸化酶具有序列1Ha：H-A-Q-Y-T-P-H-F-S，并且所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在序列1Ha中第4位具有氨基酸残基L；(3)所述天然α-葡聚糖磷酸化酶具有序列1Hb：H-A-K-Y-S-P-H-F-S，并且所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在序列1Hb中第4位具有氨基酸残基L；(4)所述天然α-葡聚糖磷酸化酶具有序列2：并且所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在序列2中第4位具有氨基酸残基A、C、D、E、G、H、I、L、M、F、S、T、V或Y；(5)所述天然α-葡聚糖磷酸化酶具有序列3L：并且所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在序列3L中第7位具有氨基酸残基C、I、L、V或W；(6)所述天然α-葡聚糖磷酸化酶具有序列3Ha：R-I-V-K-L-V-T-D-V，并且所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在序列3Ha中第7位具有氨基酸残基I；或(7)所述天然α-葡聚糖磷酸化酶具有序列3Hb：R-I-V-K-L-V-N-D-V，并且所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在序列3Hb中第7位具有氨基酸残基I；其中除了(1)-(7)中定义的替换以外，所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶具有与天然α-葡聚糖磷酸化酶相同的氨基酸序列；或者除了(1)-(7)中定义的替换以外，所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶具有相对于天然α-葡聚糖磷酸化酶氨基酸序列而言缺失、替换或添加了一个或几个氨基酸的氨基酸序列；其中所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶的酶活性等于或超过所述天然α-葡聚糖磷酸化酶；并且其中在pH6.7的20mM柠檬酸盐缓冲液中60℃加热10分钟后，所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在37℃的酶活性是加热之前所述耐热化α-葡聚糖磷酸化酶在37℃酶活性的20％或更多。