扩大方法

摘要

一种进行核酸扩大反应之方法，该方法包括形成一扩大反应混合物在含有充足的一焦磷酸盐之情况下以防止引子延伸发生，以一焦磷酸酶分解消化该焦磷酸盐，和视反应状况调整反应混和物而使一扩大反应可进行。其能被使用为一"热始"扩大。使用在此方法之特殊焦磷酸酶亦被详述而包含在专利范围之内。

主权项

一种进行核酸扩大反应之方法，包括：混合聚合酶链反应(PCR)型扩大反应所需之试剂以及防止引子延伸的至少0.5mM焦磷酸盐，以形成一PCR反应混合物；形成该PCR反应混合物之时，于该PCR反应混合物中加入一热稳定焦磷酸酶(PPase)，使其浓度至少为0.04u/50μL该PCR反应混和物，其中该热稳定焦磷酸酶是Sulfolbus acidicaldarius无机焦磷酸酶(Sac PPase)、Thermococcus Litoralis无机焦磷酸酶，或是Aeropyrum pernix无机焦磷酸酶；以及在该扩大反应之前，对该PCR反应混和物进行一培养步骤而将该PCR反应混和物培养于50℃或更高温，而该热稳定焦磷酸酶(PPase)分解该焦磷酸盐，以使该扩大反应得以进行。