一种脂质体中磷脂含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种脂质体中磷脂含量的测定方法，它包括以下步骤：制备A显色剂、B显色剂；配制标准储备液；配制样品溶液；绘制标准曲线；进行样品的含量测定：精密吸取制备的脂质体样品溶液0.5ml于15×200mm试管中，依次加入0.4ml浓度为10N硫酸和30％过氧化氢溶液0.1ml；温度170℃恒温加热60分钟；冷却后，在每个试管中加入9ml蒸馏水，混匀吸取1.5ml于另一试管，再分别加4.6ml显色A和0.1ml显色B溶液，于100℃水浴加热15分钟；冷却后在波长在822nm处比色测定吸收度；将所得样品吸收度数值代入回归曲线方程，求出样品中磷的含量。本发明方法简便、易操作，大大提高了测定结果的准确度，也提高了测定结果精密度。

主权项

一种脂质体中磷脂含量的测定方法，其特征在于它包括以下步骤：a、显色剂的制备A显色剂：精密称取0.22克钼酸铵，用蒸馏水溶解后倒入100毫升的容量瓶中，然后缓慢加入4.72毫升分析纯硫酸，放凉后稀释定容至刻度，并且倒入棕色瓶中冷藏；B显色剂：精密称取15.00克L-抗坏血酸于烧杯中，用14％Na2SO3溶解并定容至100毫升容量瓶中，倒入棕色瓶中冷藏；b、磷标准储备液的配制：精确称取经烘箱干燥的分析纯磷酸二氢钾0.4394克溶解转移至1000毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀既得100ug.mL-1浓度；c、样品溶液配制：精确吸取1.0ml被测样品脂质体溶液于10毫升容量瓶中，加水稀释至刻度；d、标准曲线绘制精密吸取磷标准储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分别置于试管中，得到质量浓度分别为10、20、40、60、80、100ug.mL-1的样品，分别加入0.4毫升10N的H2SO4和0.1毫升30％H2O2消化，将该试管在170℃恒温60分钟；冷却后在每个试管中加入9ml蒸馏水，混匀后逐个吸取1.5ml于另一试管，再分别加4.6ml A显色剂和0.1ml B显色剂溶液，于100℃水浴加热15-20分钟；冷却后在波长822-830nm处比色测定吸收值，以质量浓度ug.mL-1为横坐标，吸收值A为纵坐标，绘制标准曲线；e、样品的含量测定：精密吸取制备的样品溶液0.5ml于15×200mm试管中，依次加入0.4ml浓度为10N硫酸和30％过氧化氢溶液0.1ml消化；温度170℃恒温加热60分钟；冷却后，在每个试管中加入9ml蒸馏水，混匀吸取1.5ml于另一试管，再分别加4.6ml显色A和0.1ml显色B溶液，于100℃水浴加热15分钟；冷却后在波长在822-830nm处比色测定吸收度；将所得样品吸收度数值代入回归曲线方程，求出样品中磷的含量。