发明名称 |
重组毕赤酵母工程菌的构建及其应用 |
摘要 |
重组毕赤酵母工程菌的构建及其应用,涉及一种微生物重组构建方法及应用。将杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶插入pPIC9K,构建出重组载体pPIC9K-bgl,然后将重组载体pPIC9K-bgl线性化导入巴斯德毕赤酵母,经筛选得一株最优重组菌株,命名为GS115/pPIC9K-bgl。所构建的毕赤酵母工程菌表达杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力为1125IU/mL,蛋白表达量为1.22g/L。该酶具有酸碱稳定性、热稳定性好及催化pH范围广等优点,在酸性环境中的热稳定性大大高于单一的野生型β-葡聚糖酶,其最适反应pH为6.0,最适反应温度为50℃,具有较好的工业应用前景。 |
申请公布号 |
CN101684475A |
申请公布日期 |
2010.03.31 |
申请号 |
CN200910111908.9 |
申请日期 |
2009.06.02 |
申请人 |
厦门大学;广州甘蔗糖业研究所 |
发明人 |
卢英华;陈龙军;梁达奉;郭亭;敬科举 |
分类号 |
C12N15/81(2006.01)I;C12N9/24(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)N |
主分类号 |
C12N15/81(2006.01)I |
代理机构 |
厦门南强之路专利事务所 |
代理人 |
陈永秀;马应森 |
主权项 |
1.重组毕赤酵母工程菌的构建方法,其特征在于包括以下步骤:1)杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的获取从重组大肠杆菌XM-LU中提取质粒pXMLu,以质粒pXMLu为模板,设计引物如下:上游引物BGL1:5’--CG GAATTC ATG AAA CGA GTG TTG CT--3’,下游引物BGL2:5’--AT GCGGCCGC ACC ATG AAA CGA GTG TTG CT--3’,在杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因两端分别引入EcoR I和Not I两个酶切位点,PCR扩增得大小为717bp的杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因;2)巴斯德毕赤酵母表达载体的构建将获得的杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因用EcoR I和Not I双酶切,将双酶切后的杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因与经过EcoR I和Not I双酶切的载体pPIC9K连接,连接产物转化感受态大肠杆菌JM109,得构建好的重组载体pPIC9K-bgl;3)杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶重组毕赤酵母的构建及筛选将重组载体pPIC9K-bgl线性化导入巴斯德毕赤酵母,经筛选得一株重组菌株,即重组毕赤酵母工程菌。 |
地址 |
361005福建省厦门市思明南路422号 |