蜂胶黄酮的提取、纯化技术及其抗癌机理

摘要

本发明公开了一种蜂胶黄酮的提取方法及纯化技术。将蜂胶药材冷冻后粉碎，加入水、乙醇、乙酸乙酯，冷浸过夜后抽滤，滤渣加入乙醇、乙酸乙酯微波提取，减压回收溶剂，浓缩物用乙酸乙酯萃取，洗涤萃取液，用无水硫酸钠干燥，得到蜂胶黄酮的浓缩液。用吸附层析法——梯度洗脱工艺提纯蜂胶总黄酮。收集的洗脱液旋转蒸发浓缩，形成过饱和溶液析出结晶，得到结晶物。结晶物用高效液相色谱(HPLC)分析，成分相近者且黄酮含量高者合并，即为制备的蜂胶总黄酮。本发明工艺简单，用混合溶剂法结合微波法能更好的提炼出蜂胶黄酮有效成分，再经层析法纯化工艺，得到纯度较高的蜂胶黄酮产品。该提取物将在抗癌药物的开发方面有良好的应用前景。

主权项

1.一种蜂胶黄酮的提取方法及纯化技术，其特征在于包括以下步骤：取蜂胶药材，-10℃～-4℃冷冻8-12h后变硬变脆，用万能粉碎机将蜂胶粉碎成粗粉，准确称取蜂胶样品于三角瓶中，按照每克加入水∶乙醇(80％)∶乙酸乙酯＝10∶8∶2.5室温下冷浸过夜后，抽滤，滤渣再按照每克加入乙醇(80％)∶乙酸乙酯＝5∶1进行微波提取，微波照射时间为30s，合并两次得到的滤液，减压回收溶剂，提取物被浓缩。再将浓缩物用乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，用蒸馏水洗涤蜂胶乙酸乙酯液，用无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩，得到蜂胶黄酮的浓缩提取液。采用常见的芦丁标准曲线法测定浓缩提取液中蜂胶黄酮的含量。采用吸附层析法(Adsorption Chromato～aphy)——梯度洗脱工艺从蜂胶浓缩液中提纯蜂胶总黄酮。选用薄层层析用硅胶G作为层析吸附剂，石油醚-乙酸乙酯为梯度洗脱剂，收集洗脱液备用。前段洗脱液颜色与溶剂颜色接近，真空负压旋转蒸发浓缩洗脱液，回收溶剂得到少量乳白色腊脂样物质弃去。此后每次收集洗脱液500ml，真空负压(负压为0.03～0.05mPa，水温45℃)旋转蒸发浓缩洗脱液，回收溶剂，余下物用少量加热的乙酸乙酯超声溶解，形成过饱和溶液，室温下析出结晶，分别收集不同时段得到结晶物。取少量结晶物质采用高效液相色谱(HPLC)分析，成分相近者且黄酮含量高者合并，即为制备的蜂胶总黄酮。精密称取10mg蜂胶总黄酮，置25ml容量瓶中，加80％乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，作为蜂胶总黄酮样品液，按照上述标准曲线法测定此时蜂胶总黄酮的含量。