PRODUCCION DE UNA PROTEINA DE FUSION TNFR-IG.

摘要

Método para producir una proteína de fusión del receptor de factor de necrosis tumoral con inmunoglobulina (TNFR-Ig) en un cultivo celular de producción a gran escala, que comprende las etapas siguientes: proporcionar un cultivo celular que comprende: unas células de mamíferos que contienen un gen que codifica TNFR-Ig, gen el cual es expresado en la condición de cultivo celular; y un medio que contiene glutamina y que tiene una característica del medio seleccionada de entre el grupo que consiste en: (i) una cantidad acumulativa de aminoácidos por volumen unitario mayor que alrededor de 70 mM, (ii) una relación molar de glutamina acumulativa a asparagina acumulativa menor que alrededor de 2, (iii) una relación molar de glutamina acumulativa a aminoácidos totales acumulativos menor que alrededor de 0,2, (iv) una relación molar de iones inorgánicos acumulativos a aminoácidos totales acumulativos entre alrededor de 0,4 y 1, (v) una cantidad acumulativa combinada de glutamina y asparagina por volumen unitario mayor que alrededor de 16 mM, y sus combinaciones; mantener dicho cultivo en una fase de crecimiento inicial en un primer conjunto de condiciones de cultivo durante un primer período de tiempo suficiente para permitir que dichas células se reproduzcan hasta una densidad celular viable en un intervalo de alrededor de 20%-80% de la densidad celular viable posible máxima si dicho cultivo se mantuviese en el primer conjunto de condiciones de cultivo; cambiar por lo menos una de las condiciones de cultivo, de forma que se aplique un segundo conjunto de condiciones de cultivo; mantener dicho cultivo durante un segundo período de tiempo en el segundo conjunto de condiciones y durante un segundo período de tiempo de forma que TNFR-Ig se acumule en el cultivo celular.