用于产生同质糖蛋白的遗传改良酵母

摘要

本发明涉及用于产生具有优化的和同质聚糖结构的糖蛋白的遗传改良酵母。这些酵母包括：Och1基因的失活；通过同源重组将含有第一启动子，和含有α-1，2-甘露糖苷酶I的编码序列的开放阅读框的表达盒整合到营养缺陷标记中；以及整合含有与所述第一启动子不同的第二启动子和外源糖蛋白的编码序列的盒。这些酵母使得产生具有优化的和98％同质糖基化的EPO成为可能。

主权项

1、遗传改良的酵母，能够产生具有含Man5GlcNac2结构的同质聚糖的糖蛋白，所述酵母包括下列改良：a)通过编码抗生素抗性基因的异源序列的同源重组通过插入将编码α1，6-甘露糖转移酶的Och1基因失活(delta-Och1菌株)，b)通过同源重组将表达盒整合到营养缺陷标记中，该表达盒包括选自分别具有序列SEQ ID：16-26的酿酒酵母或栗酒裂殖酵母的pGAP、pGAL1、PGK、TEF、adh1、nmt 1、SV40、PMA1、CaMV、pet56或ADH2启动子，含有内质网或高尔基体靶向序列的α-1-2甘露糖苷酶I编码序列的开放阅读框和转录终止子，c)通过同源重组将表达盒整合到营养缺陷标记中，该表达盒包括选自分别具有序列SEQ ID：16-26的酿酒酵母或栗酒裂殖酵母的pGAP、pGAL1、PGK、TEF、adh1、nmt 1、SV40、PMA1、CaMV、pet56或ADH2启动子，所述c)中的启动子与b)中的启动子不同，含有需要产生的外源糖蛋白编码序列的开放阅读框和转录终止子。